本文關(guān)鍵詞：FOXO1真核表達(dá)載體構(gòu)建及其對(duì)TNF-α介導(dǎo)的A549細(xì)胞凋亡的影響

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【摘要】：目的構(gòu)建FOXO1真核表達(dá)質(zhì)粒,明確FOXO1對(duì)TNF-α介導(dǎo)的Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞凋亡的影響及其可能存在的調(diào)控機(jī)制。方法根據(jù)Gen Bank中人FOXO1 CDS序列設(shè)計(jì)并合成引物,提取A549細(xì)胞總RNA,通過(guò)RT-PCR獲得FOXO1目的基因片段;通過(guò)酶切、連接,構(gòu)建GV230-FOXO1真核表達(dá)質(zhì)粒并進(jìn)行測(cè)序分析鑒定;經(jīng)鑒定后的表達(dá)載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入A549細(xì)胞,熒光顯微鏡及Western blot法檢驗(yàn)FOXO1蛋白表達(dá)。體外培養(yǎng)A549細(xì)胞,利用脂質(zhì)體Lipofectamine~(TM) 2000將本次合成的GV230-FOXO1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入A549細(xì)胞,給予10 ng/ml TNF-α刺激24 h,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bim的表達(dá)。結(jié)果成功構(gòu)建GV230-FOXO1熒光真核表達(dá)質(zhì)粒;FOXO1組細(xì)胞凋亡率明顯高于TNF-α組和陰性對(duì)照組(P0.05),FOXO1組蛋白Bim的表達(dá)明顯高于TNF-α組和陰性對(duì)照組(P0.05)。結(jié)論 FOXO1在TNF-α介導(dǎo)的A549細(xì)胞損傷中起促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用,其作用機(jī)制可能為通過(guò)上調(diào)促凋亡蛋白Bim的表達(dá),從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)研究生院;廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： FOXO 真核表達(dá)質(zhì)粒 TNF-α Apoptosis Bim
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81200002,81370173)
【分類號(hào)】：R563
【正文快照】： FOXO是FOX家族的1個(gè)亞群,包括FOXO1、FOXO3、FOXO4和FOXO6等,可受磷酸化、乙�；头核鼗{(diào)節(jié),不同亞族的調(diào)節(jié)方式有所不同,其中磷酸化是最主要的調(diào)節(jié)方式[1-2]。他們?cè)诓溉閯?dòng)物細(xì)胞的凋亡、應(yīng)激、細(xì)胞周期阻滯、DNA損傷/修復(fù)以及糖代謝調(diào)節(jié)中起著重要作用。其中FOXO1作為體內(nèi)

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1 李瀚e，

本文編號(hào)：801073