發(fā)布時(shí)間：2017-09-03 22:00

  本文關(guān)鍵詞：NOTCH信號(hào)通路在慢性阻塞性肺疾病免疫失衡中的作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 肺疾病 慢性阻塞性 Notch信號(hào)通路 免疫失衡 Notch1 Hes1 Th1 Th2 Th17 Treg

【摘要】：目的Notch信號(hào)通路通過調(diào)節(jié)T細(xì)胞的發(fā)育和分化參與哮喘等呼吸系統(tǒng)疾病的免疫失衡,但在慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)中的作用尚不清楚。本研究通過觀察Notch信號(hào)通路中Notch1受體、Jagged1配體及其下游產(chǎn)物Hes1對(duì)慢阻肺小鼠脾源性CD4+ T淋巴細(xì)胞Th1、Th2、Th17、Treg各亞群及Thl/Th2和Th17/Treg比值的影響,探討Notch信號(hào)通路在慢阻肺免疫失衡中的作用。方法將SPF級(jí)8周齡雄性Balb/c小鼠120只,采用隨機(jī)數(shù)字表法分為健康對(duì)照組、慢阻肺組、慢阻肺二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide, DMSO)組及慢阻肺γ分泌酶抑制劑(Gamma secretase inhibitors, GSI)組。采用香煙煙霧暴露90天建立小鼠慢阻肺模型,觀察肺功能及病理變化。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組小鼠脾源性Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Th17細(xì)胞、Treg所占比例；采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)和蛋白印跡法(Western blot, WB)檢測(cè)各組肺泡巨噬細(xì)胞Jagged1配體、脾臟T淋巴細(xì)胞Notch1受體及其下游Hes1 mRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果(1)慢阻肺小鼠模型建立：?jiǎn)渭儫熿F暴露90天后,成功建立小鼠慢阻肺模型。慢阻肺組小鼠肺組織中可見明顯的支氣管炎癥和肺氣腫改變,健康對(duì)照組小鼠無此改變；慢阻肺組吸氣峰流速(Peak inspiratory flow, PIF)和呼氣峰流速(Peak expiratory flow, PEF)為(6.82±0.46,3.87±0.44)明顯低于健康對(duì)照組(9.84±0.46,7.96±0.52)(均P0.01)；(2)慢阻肺組小鼠Th1、Th17和Treg細(xì)胞比例(13.20±0.95,10.22±0.45,0.41±0.09)%較健康對(duì)照組小鼠細(xì)胞比例(8.07±0.44,5.98±0.26,0.26±0.05)%明顯增加,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；慢阻肺組小鼠Th2細(xì)胞比例(0.72±0.12)%較健康組小鼠(0.65±0.08)%未見明顯增加,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；而慢阻肺GSI組Th1和Th17細(xì)胞比例(9.48±0.66,7.70±0.39)%較慢阻肺組小鼠(13.20±0.95,10.22±0.45)%明顯減少,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；慢阻肺GSI組小鼠Th2和Treg細(xì)胞比例(0.71±0.09,0.45±0.07)%較慢阻肺組小鼠(0.72±0.12,0.41±0.09)%未見明顯增加,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；慢阻肺DMSO組和慢阻肺組之間脾臟Th1、Th2、Th17及Treg細(xì)胞的比例無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。慢阻肺組Th1/Th2比值(18.70±4.12)較健康對(duì)照組(12.63±1.91)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；慢阻肺GSI組Th1/Th2的比值(13.63±2.56)較慢阻肺組(18.70±4.12)明顯減低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。慢阻肺組和慢阻肺DMSO組Th1/Th2的比值未見明顯差異。慢阻肺組Th17/Treg比值(26.27±7.09)較健康對(duì)照組(24.07±6.01)升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；而慢阻肺GSI組Th17/Treg的比值(17.55±3.17)較慢阻肺組(26.27±7.09)明顯減低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。慢阻肺組和慢阻肺DMSO組Th17/Treg的比值未見明顯差異。(3)慢阻肺組小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞表面Notch1受體及其下游Hes1 mRNA表達(dá)(5.15±0.77,1.92±0.32)較健康組(1.00±0.00,1.00±0.00)均明顯升高,慢阻肺組肺泡巨噬細(xì)胞表面Jagged1 mRNA的表達(dá)(2.23±0.36)較健康組(1.00±0.00)明顯升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P70.01)；慢阻肺GSI組Notch1及其下游Hes1 mRNA表達(dá)(3.47±0.41,1.34±0.04)較慢阻肺組(5.15±0.77,1.92±0.32)減少,慢阻肺GSI組肺泡巨噬細(xì)胞表面Jagged1mRNA (1.80±0.21)較慢阻肺組(2.23±0.36)明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；慢阻肺DMSO組較慢阻肺組Notch1、Jagged1及其下游Hes1 mRNA的表達(dá)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(4)慢阻肺組小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞表面Notch1受體及其下游Hes1蛋白(0.85±0.04,0.16±0.02)較健康組(0.17±0.01,0.09±0.01)均明顯升高,慢阻肺組肺泡巨噬細(xì)胞表面Jagged1蛋白(0.37±0.01)較健康組(0.21±0.01)明顯升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；慢阻肺GSI組Notch1及其下游Hes1蛋白(0.53±0.04,0.12±0.01)較慢阻肺組(0.85+0.04,0.16±0.02)減少,慢阻肺GSI組肺泡巨噬細(xì)胞表面Jagged1蛋白的表達(dá)(0.28±0.01)較慢阻肺組(0.37±0.01)明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；慢阻肺DMSO組較慢阻肺組Notch1、Jagged1及其下游Hesl蛋白的表達(dá)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(5)相關(guān)性分析：慢阻肺組和慢阻肺GSI組Notch1和Hes1 mRNA和蛋白的表達(dá)與Thl和Th17細(xì)胞呈正相關(guān),與Th2和Treg細(xì)胞呈負(fù)相關(guān),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Jagged1 mRNA和蛋白的表達(dá)與Thl和Th17細(xì)胞呈負(fù)相關(guān),與Th2和Treg細(xì)胞呈正相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；結(jié)論1.單純香煙煙霧暴露法可建立慢阻肺小鼠模型2.慢阻肺小鼠存在Th1/Th2、Th17/Treg免疫紊亂；3.慢阻肺小鼠Notch1受體、Jagged1配體及其下游Hesl分子mRNA及蛋白水平升高,并與Th1/Th2和Th17/Treg相關(guān)；4.GSI能部分抑制Notch1、 Jagged1和Hes1及T細(xì)胞各亞群水平,表明Notch信號(hào)通路參與慢阻肺的免疫紊亂。
【關(guān)鍵詞】：肺疾病 慢性阻塞性 Notch信號(hào)通路 免疫失衡 Notch1 Hes1 Th1 Th2 Th17 Treg
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R563.9
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• Abstract6-10
• 前言10-22
• 材料和方法22-37
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-63
• 討論63-67
• 結(jié)論67-68
• 參考文獻(xiàn)68-77
• 在研期間研究成果77-78
• 附錄 英文縮寫一覽表78-80
• 致謝80

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