本文關鍵詞：染矽塵大鼠肺泡上皮細胞誘導骨髓間充質干細胞分化的研究

  更多相關文章： 骨髓間充質干細胞 矽肺 肺泡上皮細胞 共培養(yǎng) 細胞因子

【摘要】：目的:觀察與染矽塵大鼠肺泡上皮細胞(AEC)共培養(yǎng)能否誘導骨髓間充質干細胞(BMMSCs)分化為AEC。方法:1、隨機取6只無特定病原體(SPF)級健康雄性SD大鼠,采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)BMMSCs。2、隨機取同批大鼠14只,其中7只以1.0 mL質量濃度為40 g/L的矽塵混液氣管內注入制作染矽塵大鼠模型,用免疫粘附純化法培養(yǎng)染矽塵大鼠AEC,另7只注入0.9%氯化鈉溶液1.0 mL作為正常對照大鼠,采用免疫粘附純化法培養(yǎng)正常大鼠AEC。3、設置實驗組:以BMMSCs與染矽塵大鼠AEC兩種細胞共培養(yǎng)作為實驗組,對照A組:以BMMSCs和正常大鼠AEC兩種細胞共培養(yǎng)作為對照A組,對照B組:以BMMSCs單獨培養(yǎng)作為對照B組。4、分別于共培養(yǎng)第4天和第8天時,以倒置熒光顯微鏡(IFM)觀察各組BMMSCs的形態(tài)變化。5、分別于共培養(yǎng)第4天和第8天時,對各組BMMSCs進行水通道蛋白5(AQP5)和表面活性蛋白C(SP-C)免疫熒光雙重染色,分別用IFM和激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)觀察BMMSCs的熒光表達情況,采用Image-pro plus 6.0圖像分析軟件對兩種顯微鏡下2種蛋白的熒光進行積分光密度(IOD)分析。6、分別于共培養(yǎng)第4天和第8天時,采用實時熒光定量PCR檢測各組BMMSCs中AQP5和SP-C兩種信使RNA(mRNA)的表達水平。7、分別于共培養(yǎng)第4天和第8天,采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測培養(yǎng)液中轉化生長因子β1(TGFβ1)和表皮生長因子(EGF)的濃度。結果:1、各組細胞形態(tài)觀察顯示,共培養(yǎng)后,實驗組和對照A組的BMMSCs逐漸從長梭形向立方形和多邊形轉化,共培養(yǎng)第8天時細胞形態(tài)變化較第4天更明顯,但對照A組BMMSCs在兩個時間點形態(tài)變化無實驗組明顯,對照B組BMMSCs的形態(tài)在兩個時間點無明顯變化。2、IFM和LSCM觀察顯示:在共培養(yǎng)第4天和第8天,實驗組和對照A組BMMSCs均可見呈綠色熒光的AQP5和紅色熒光的SP-C表達,對照B組BMMSCs在兩個時間點均可見少量AQP5綠色熒光表達,均無SP-C紅色熒光表達,相較于IFM,LSCM可清晰地觀察不同蛋白的表達及其在細胞內的分布情況。3、IOD分析顯示:在共培養(yǎng)第4天和第8天,IFM和LSCM所得BMMSCs的2種蛋白熒光IOD值在實驗組均較同時間點對照A組和對照B組增強(P0.01),而對照A組BMMSCs的2種蛋白熒光IOD值又均較相同時間點對照B組增強(P0.01);在不同時間點之間進行比較,實驗組和對照A組的BMMSCs在第8天時2種蛋白的熒光IOD值均較同組第4天時增強(P0.01)。將兩種顯微鏡所得IOD進行比較,除對照B組的SP-C蛋白熒光IOD外,IFM所得3組BMMSCs的2種蛋白熒光IOD均高于同組LSCM所得(P0.01)。4、實時熒光定量PCR結果顯示:相同時間點實驗組AQP5和SP-C mRNA表達水平較對照A組和對照B組均高(P0.01),對照A組較對照B組高(P0.01);實驗組和對照A組在共培養(yǎng)第8天時mRNA表達量均較第4天高(P0.01)。5、TGFβ1和EGF濃度檢測顯示:在相同時間點實驗組細胞培養(yǎng)液中TGF-β1濃度較對照A組和對照B組均低(P0.01),EGF濃度較對照A組和對照B組均高(P0.01),對照A組細胞培養(yǎng)液中TGF-β1濃度較對照B組低(P0.01),EGF濃度較對照B組高(P0.01);相同組別兩時間點間比較,TGF-β1濃度均無統(tǒng)計學意義(P0.01),EGF濃度實驗組和對照A組差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。結論:染矽塵大鼠AEC能有效誘導BMMSCs分化成AEC;其誘導分化作用可能與BMMSCs旁分泌的細胞因子有關。
【關鍵詞】：骨髓間充質干細胞 矽肺 肺泡上皮細胞 共培養(yǎng) 細胞因子
【學位授予單位】：貴州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R135.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略詞表10-11
• 引言11-13
• 材料與方法13-21
• 結果21-29
• 討論29-33
• 結論33-34
• 參考文獻34-40
• 綜述40-51
• 參考文獻46-51
• 作者簡歷51-52
• 致謝52-53
• 學位論文數(shù)據(jù)集53

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本文編號：784249