本文關(guān)鍵詞：矢車菊素-3-O-葡萄糖苷對脂多糖誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用及其在急性肺損傷中治療作用

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【摘要】：急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)是急性肺損傷(ALI)的嚴(yán)重的形式。是由除心源性以外的各種肺內(nèi)外致病因素(嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、有害氣體吸入等)造成彌漫性的肺部急性炎癥、肺間質(zhì)和肺泡水腫,臨床上常常表現(xiàn)為進(jìn)行性的呼吸困難和頑固性的低氧血癥。其病程兇險,進(jìn)展迅速,預(yù)后差,死亡率高。ARDS/ALI的發(fā)病機(jī)制可能與炎性介質(zhì)、氧化應(yīng)激產(chǎn)物、血管內(nèi)皮和肺泡上皮損傷等多種因素有關(guān)。大量炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子導(dǎo)致肺微血管通透性增加,造成肺的順應(yīng)性降低及肺表面張力增大,進(jìn)而肺泡塌陷、肺有效通氣面積減少,導(dǎo)致V/Q比例嚴(yán)重失調(diào),從而形成進(jìn)行性的低氧血癥。近期研究發(fā)現(xiàn),及時有效的抗炎、抗氧化等措施可以提高肺組織的氧合能力,對改善肺功能、糾正低氧血癥等有重要意義。脂多糖(1 ipopolysaccharide, LPS)是革蘭氏陰性菌(gramnegative bacterium, G-)細(xì)胞壁的主要致病因素,因此,腹腔內(nèi)注射LPS可以誘導(dǎo)內(nèi)毒素相關(guān)性ALI/ARDS,并能很好地模擬臨床中出現(xiàn)的因嚴(yán)重感染而引發(fā)的ARDS/ALI.脂多糖主要通過激活多種炎性或效應(yīng)細(xì)胞(巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等),誘發(fā)大量細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)(如TNF-α、 IL-1β、IL-6等)、氧自由基(ROS)及氧化應(yīng)激相關(guān)因子(MDA、SOD等)的過度失控性釋放,從而引起肺泡間微血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞的損傷,使肺微血管的通透性增高,導(dǎo)致肺間質(zhì)水腫及肺臟透明膜形成,造成彌漫幽市損傷。這些參與炎癥反應(yīng)的炎性細(xì)胞及其釋放的細(xì)胞因子、活性氧物質(zhì)、以及相應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),在ARDS/ALI的發(fā)生、發(fā)展的中心環(huán)節(jié),是形成ARDS/ALI的病理生理學(xué)基礎(chǔ)。NF-κB和MAPK信號通路的活化在ARDS的疾病發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用。NF-κB和MAPK信號通路可以通過LPS調(diào)節(jié)釋放的前炎癥因子,如TNF-α、IL-6、IL-1β等的刺激而活化。同時,ROS也參與了NF-κB的活化,增強(qiáng)細(xì)胞質(zhì)的信號途徑,導(dǎo)致NF-κB向核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn),氧化-還原反應(yīng)控制NF-κB形成的幾個關(guān)鍵步驟。矢車菊素-3-O-葡糖苷(C3G),是自然界中分布最廣的植物色素,是一種屬于黃酮類化合物的花色苷,其廣泛存在于如楊梅、藍(lán)莓、紫甘薯等人類植物膳食成分中。既往的研究發(fā)現(xiàn),矢車菊素-3-O-葡萄糖苷能夠使細(xì)胞膜具抗脂質(zhì)過氧化和清除氧自由基作用,并能通過作用于炎癥和氧化應(yīng)激相關(guān)細(xì)胞信號通路而影響內(nèi)皮細(xì)胞,從而防范內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂的進(jìn)展。本研究將復(fù)制脂多糖誘導(dǎo)的小鼠及HUVEC體內(nèi)/外模型,探討矢車菊素-3-O-葡糖苷從抗炎、抗氧化等應(yīng)激反應(yīng),細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等多角度在ARDS/ALI病理生理過程中的作用,深入探討C3G對ARDS的保護(hù)作用機(jī)制,為臨床防治急性呼吸窘迫綜合癥提供一個新的解決思路和研究方法。實(shí)驗(yàn)方法：(一)體外試驗(yàn)：體外正常條件下培養(yǎng)HUVEC細(xì)胞,所有試驗(yàn)用3-8代細(xì)胞。相應(yīng)實(shí)驗(yàn)分組：(1)對照組：細(xì)胞培養(yǎng)基中加入平衡PBS溶液,體積與LPS模型組和LPS+C3G組相等；(2)LPS模型組：細(xì)胞培養(yǎng)基中加入LPS (1μg/mL); (3)LPS+C3G組：細(xì)胞培養(yǎng)基中先加入C3G,一小時后加入LPS(濃度為1 μg/mL)。MTT法測定細(xì)胞的活力及C3G的細(xì)胞毒性、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測定細(xì)胞培養(yǎng)液上清中細(xì)胞炎性因子(TNF-α, IL-6和IL-1β)水平。(二)體內(nèi)試驗(yàn)：成年雄性昆明小鼠(8-10周齡,18-20g),隨機(jī)分為正常對照組、LPS造模組,LPS+C3G預(yù)處理組。C3G(12.5 mg/kg、25mg/kg、50mg/kg)腹膜內(nèi)注射在LPS (20 mg/kg)刺激前1小時進(jìn)行預(yù)處理,LPS注射后6小時后麻醉處死,測量支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞計數(shù)(總細(xì)胞、巨噬細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù))及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測定細(xì)胞炎性因子水平(TNF-α, IL-6和IL-1p),以及肺組織勻漿中髓過氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平。測量肺組織濕/干比、肺組織HE染色；運(yùn)用相關(guān)Western blot技術(shù),檢測LPS誘導(dǎo)下ARDS相關(guān)的重要信號通路NF-κB和MAPK中關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白活化狀態(tài)(p65/p-p65、IκB/p-IκB、 MEK/p-MEK、JNK/p-JNK、P38/p-P38、ERK/p-ERK等)水平。結(jié)果：與LPS對照組相比,C3G顯著降低脂多糖導(dǎo)致的急性肺損傷小鼠支氣管肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)、嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)和巨噬細(xì)胞計數(shù),明顯減低肺組織勻漿中丙二醛含量、髓過氧化物酶活性,顯著提高肺組織中的超氧化物歧化酶活性,并能夠降低肺濕/干重比、改善肺組織炎癥病理變化的嚴(yán)重程度。通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測定,C3G濕著抑制了脂多糖誘導(dǎo)的人氣靜脈內(nèi)皮細(xì)胞北清液和小鼠肺組織支氣管肺泡灌洗液(BALF)中促炎細(xì)胞因子(TNF-α, IL-6和IL-1p)的產(chǎn)生；在小鼠肺組織Western印跡分析中,矢車菊素-3-O-葡糖苷(50mg/kg)預(yù)處理組能通過阻斷IκBα, NF-κB/ P65, ERK, p38和JNK的磷酸化,顯著抑制LPS誘導(dǎo)核因子-κB通路及絲裂原活化蛋白激酶MAPK信號傳導(dǎo)途徑。總之,C3G能夠通過抗炎和抗氧化及抑制NF-κB和MAPK通路的活化,而在改善肺損傷的嚴(yán)重程度中發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：矢車菊素-3-O-葡糖苷(C3G) 脂多糖(LPS) 急性呼吸窘迫綜合癥/急性肺損傷(ARDS/ALI) 核因子-κB(NF-κB) 絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R563.8
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-8
• 英文縮略語一覽表8-10
• 前言10-14
• 材料與方法14-30
• 結(jié)果30-32
• 討論32-34
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 綜述 楊梅提取物生物活性39-45
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 致謝45-46
• 學(xué)位論文目錄46-47
• 附錄1 附圖47-51

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本文編號：719594