本文關(guān)鍵詞：β-catenin蛋白敲除對(duì)肺成纖維細(xì)胞活性影響的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的： 通過(guò)在肺成纖維細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染F-TrCP-Ecad質(zhì)粒，觀察β-catenin蛋白敲除對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞（CCC-REPF-1）活性的影響，探討β-catenin信號(hào)通路在TGF-β1誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞活化中的作用及其機(jī)制。 方法： 體外培養(yǎng)大鼠肺成纖維細(xì)胞（CCC-REPF-1），分為正常組、TGF-β1刺激組、pcDNA3轉(zhuǎn)染加TGF-β1組、F-TrCP-Ecad加TGF-β1組。各組細(xì)胞TGF-β1(5ng/mL)刺激48h后，光鏡下觀察各組肺成纖維細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變；收集細(xì)胞采用CCK-8法觀察各組肺成纖維細(xì)胞增殖情況；Western印跡法檢測(cè)各組細(xì)胞中α-SMA、Fn、E-cadherin的表達(dá)；采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)β-catenin途徑下游轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物α-SMA，colⅠ,colⅢ表達(dá)。 結(jié)果： 1、光鏡下觀察肺成纖維細(xì)胞：成纖維細(xì)胞呈梭型，有較長(zhǎng)的突起，胞核呈卵圓形，位于細(xì)胞中央，成放射狀和柵欄狀排列。TGF-β1刺激后，細(xì)胞體積明顯增大，胞突消失，細(xì)胞數(shù)量明顯增多，細(xì)胞間隙變小。F-TrCP-Ecad轉(zhuǎn)染組大部分細(xì)胞呈梭型，有較長(zhǎng)的突起，細(xì)胞間有明顯間隙。 2、CCK-8法觀察各組肺成纖維細(xì)胞增殖：與正常組比較, TGF-β1刺激組、pcDNA3轉(zhuǎn)染加TGF-β1組其OD值明顯增高，兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；F-TrCP-Ecad轉(zhuǎn)染組OD值較TGF-β1刺激組明顯減低(P＜0.01)，與正常組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3、Western印跡法檢測(cè)各組細(xì)胞中α-SMA、Fn、E-cadherin的表達(dá)：與正常組比較, TGF-β1刺激組、pcDNA3轉(zhuǎn)染組其α-SMA、Fn蛋白表達(dá)顯著升高, E-cadherin表達(dá)顯著降低(P＜0.01)，兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；F-TrCP-Ecad轉(zhuǎn)染組較TGF-β1刺激組α-SMA、Fn蛋白表達(dá)顯著降低，E-cadherin表達(dá)顯著升高(P＜0.01)，與正常組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4、熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)α-SMA，colⅠ,colⅢ表達(dá)：與正常組比較, TGF-β1刺激組、pcDNA3轉(zhuǎn)染組β-catenin途徑α-SMA，colⅠ,colⅢmRNA表達(dá)增高(P＜0.01)；兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，F(xiàn)-TrCP-Ecad轉(zhuǎn)染組較TGF-β1刺激組α-SMA，colⅠ,colⅢ表達(dá)降低(P＜0.01)，，與正常組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論： 1、TGF-β1是促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞增殖、活化的重要細(xì)胞因子，β-catenin途徑是TGF-β1發(fā)揮作用的重要信號(hào)通路。 2、β-catenin蛋白敲除載體（F-TrCP-Ecad質(zhì)粒）通過(guò)阻斷該信號(hào)途徑，阻斷成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為其活性形式肌成纖維細(xì)胞，同時(shí)抑制成纖維細(xì)胞釋放胞外基質(zhì)，阻斷纖維化進(jìn)程。
【關(guān)鍵詞】：TGF-β1 肺成纖維細(xì)胞 β-catenin 蛋白敲除 F-TrCP-Ecad質(zhì)粒
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R563
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文詞匯縮略表9-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-20
• 結(jié)果20-23
• 討論23-26
• 結(jié)論26-27
• 參考文獻(xiàn)27-29
• 綜述29-37
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 個(gè)人簡(jiǎn)介37-38
• 致謝38

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：636195