本文關(guān)鍵詞：Caspase-1在不可分型流感嗜血桿菌致呼吸道感染中的作用研究

  更多相關(guān)文章： 不可分型流感嗜血桿菌 A549 炎癥反應(yīng) 固有免疫 Caspase-1

【摘要】：不可分型流感嗜血桿菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)是流感嗜血桿菌中的無莢膜型,為機(jī)會(huì)致病菌,是小兒中耳炎和成人下呼吸道感染最重要的病原體。NTHi引起的下呼吸道感染與慢性阻塞性肺疾病(COPD)的急性發(fā)作密切相關(guān),主要與NTHi感染導(dǎo)致的機(jī)體固有免疫功能缺失、氣道屏障系統(tǒng)破壞和肺組織損傷有關(guān)。研究表明,NTHi感染引起的氣道炎癥反應(yīng)主要是通過激活促炎癥因子IL-1β、CXCL-2和TNF-α的釋放,而這些前炎癥因子的高表達(dá)是通過Toll樣受體(TLRs)激活MAPK和NF-κB這兩條細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路來完成的。近期研究表明NOD樣受體(NLRs)信號(hào)通路是固有免疫應(yīng)答的重要組成部分,其在抵御病原體感染的過程中發(fā)揮了重要作用。NLRs蛋白3,NLRP3(nucleotide-binding oligomerization domain-leucine-rich repeats containing pyrin domain3)炎性小體能夠活化Caspase-1進(jìn)而產(chǎn)生并釋放成熟的促炎因子白細(xì)胞介素1β和白細(xì)胞介素18,參與體內(nèi)炎癥反應(yīng)。Caspase-1是NLRP3炎癥復(fù)合體中的一種重要蛋白,NLRP3炎癥復(fù)合體誘導(dǎo)組裝后會(huì)激活Caspase-1,剪切pro-IL-1β和pro-IL-18轉(zhuǎn)化成有成熟的IL-1β和IL-18,從而引發(fā)前炎性反應(yīng)和抗菌反應(yīng)。有研究發(fā)現(xiàn)NLRP3炎性小體和Caspase-1的激活與李斯特菌和金黃色葡萄球菌感染引起的先天性免疫應(yīng)答密切相關(guān),而其與NTHi在呼吸道感染中的關(guān)系卻鮮見報(bào)道。為完成此研究,本實(shí)驗(yàn)首先選用不同濃度的NTHi感染人肺泡上皮細(xì)胞株(A549)建立呼吸道感染體外模型,進(jìn)而研究NTHi對(duì)A549的存活及凋亡的影響并以分子生物學(xué)手段分析NLRP3炎性小體、Caspase-1、IL-1β和IL-18的表達(dá)情況,以及檢測(cè)A549中的炎癥因子IL-6和TNF-α在中的含量。我們又以NTHi感染小鼠,建立呼吸道感染體內(nèi)模型,并應(yīng)用HE染色和免疫組化等方法檢測(cè)氣道組織損傷和Caspase-1表達(dá)情況,同時(shí)RT-PCR檢測(cè)肺組織中Caspase-1、NF-κB和IL-1β的m RNA水平。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,1、NTHi在培養(yǎng)9~13h后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,得出細(xì)菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期方程為:Y=0.586x+8.015(R=0.985);2、不同濃度的NTHi感染降低細(xì)胞存活率,并增加凋亡和壞死的細(xì)胞數(shù)量,同時(shí)上調(diào)炎癥細(xì)胞因子IL-6和TNF-α的表達(dá);3、不同濃度的NTHi感染A549導(dǎo)致IL-1β和IL-18的表達(dá)水平隨著細(xì)菌濃度的增高而增高,而當(dāng)NTHi濃度達(dá)到1×108 CFU/m L時(shí),Caspase-1的表達(dá)開始出現(xiàn)減少,同時(shí)IL-1β和IL-18的表達(dá)繼續(xù)增加。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:1、NTHi感染能導(dǎo)致小鼠肺泡間隔斷裂,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),組織損傷程度與細(xì)菌濃度相關(guān);2、NTHi感染上調(diào)小鼠氣道組織中Caspase-1的表達(dá),同時(shí)上調(diào)NF-κB和IL-1βm RNA。結(jié)論:1、NTHi感染可能會(huì)通過上調(diào)固有免疫中炎性小體的重要組分——Caspase-1、IL-1β和IL-18的表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞炎癥的產(chǎn)生,降低A549細(xì)胞存活率并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和死亡。2、NTHi可能通過NF-κB途徑上調(diào)固有免疫分子Caspase-1的表達(dá)致BALB/c小鼠出現(xiàn)呼吸道黏膜損傷,引發(fā)下呼吸道感染。
【關(guān)鍵詞】：不可分型流感嗜血桿菌 A549 炎癥反應(yīng) 固有免疫 Caspase-1
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R56
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 中英文對(duì)照表12-14
• 第一章 緒論14-19
• 1.1 不可分型流感嗜血桿菌與呼吸道疾病的關(guān)系14-15
• 1.2 固有免疫15-17
• 1.3 不可分型流感嗜血桿菌與固有免疫的研究現(xiàn)況17-19
• 第二章 體外實(shí)驗(yàn)研究19-38
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料19
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株19
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)用細(xì)菌菌株19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器19-21
• 2.2.1 主要試劑19-21
• 2.2.2 主要儀器與設(shè)備21
• 2.3 主要試劑配制21-23
• 2.3.1 巧克力瓊脂培養(yǎng)基的配制21-22
• 2.3.2 細(xì)菌凍存液22
• 2.3.3 NTHi增菌液22
• 2.3.4 細(xì)胞凍存液22
• 2.3.5 0.4%臺(tái)盼藍(lán)染液22
• 2.3.6 Western Blot實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 2.3.7 ELISA實(shí)驗(yàn)材料23
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法23-28
• 2.4.1 NTHi的分離培養(yǎng)及其生長(zhǎng)曲線的繪制23-24
• 2.4.2 A549細(xì)胞的培養(yǎng)24
• 2.4.3 NTHi感染A549細(xì)胞模型的建立24
• 2.4.4 不同濃度NTHi對(duì)細(xì)胞活力和凋亡的影響24-25
• 2.4.5 WB檢測(cè)NTHi標(biāo)準(zhǔn)株和臨床株感染的A549細(xì)胞產(chǎn)生的Caspase-1，IL-1β 和IL-18蛋白表達(dá)水平25-27
• 2.4.6 ELISA法檢測(cè)NTHi標(biāo)準(zhǔn)株和臨床株作用后細(xì)胞因子TNF-α 和IL-6 的蛋白表達(dá)水平27
• 2.4.7 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析27-28
• 2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-36
• 2.5.1 NTHi分離培養(yǎng)及細(xì)菌生化反應(yīng)和革蘭染色形態(tài)鑒定28-29
• 2.5.2 NTHi生長(zhǎng)曲線的繪制29
• 2.5.3 NTHi在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期活菌數(shù)與OD600值的函數(shù)關(guān)系29-30
• 2.5.4 NTHi抑制A549細(xì)胞存活率30-31
• 2.5.5 NTHi誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡31-32
• 2.5.6 NTHi感染促進(jìn)A549細(xì)胞表達(dá)炎癥蛋白Caspase-1，IL1β和IL-1832-34
• 2.5.7 NTHi感染促進(jìn)A549細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子TNF-α 和IL-634-36
• 2.6 討論36-38
• 第三章 體內(nèi)研究38-51
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料38-39
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物38
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑38-39
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器39
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法39-43
• 3.2.1 NTHi引起的呼吸道感染動(dòng)物模型的建立39-40
• 3.2.2 小鼠肺組織和氣管HE染色40
• 3.2.3 小鼠的氣管和肺組織免疫組織化學(xué)染色40-41
• 3.2.4 RT-PCR檢測(cè)小鼠肺組織Caspase-1、NF- κB和IL-1βm RNA表達(dá)41-43
• 3.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析43
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-49
• 3.3.1 小鼠呼吸道感染NTHi43-44
• 3.3.2 NTHi感染損傷小鼠氣管和肺組織44-46
• 3.3.3 NTHi感染上調(diào)小鼠氣管和肺組織中Caspase-1 的表達(dá)46-48
• 3.3.4 NTHi上調(diào)小鼠肺組織中Caspase-1，NF-κB和IL-1βm RNA水平48-49
• 3.4 討論49-51
• 第四章 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 攻讀碩士期間所取得的科研成果59-60
• 致謝60

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張順業(yè),孫宗全,劉立新,哈斯朝努;Carvedilol attenuates CPB-induced apoptosis in dog heart: regulation of Fas/FasL and caspase-3 pathway[J];Chinese Medical Journal;2003年05期

2 姚克,王凱軍,徐雯,孫朝暉,申屠形超,邱培瑾;Caspase-3 and its inhibitor Ac-DEVD-CHO in rat lens epithelial cell apoptosis induced by hydrogen in vitro[J];Chinese Medical Journal;2003年07期

3 鄭廣瑛,張成,李志剛;Early activation of caspase-1 after retinal ischemia and reperfusion injury in mice[J];Chinese Medical Journal;2004年05期

4 張曉華,李兆申,屠振興,許國(guó)銘,龔燕芳,滿曉華;Therapeutic effect of Caspase-1 inhibitor on liver injury in experimental severe acute pancreatitis[J];Journal of Medical Colleges of PLA;2004年02期

5 高慧;鄒麗;;The Effects of Magnesium Sulfate on Fetal Rats of FGR and the Expression of Caspase-3 in the Placenta of Maternal Rat[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2005年06期

6 屈軍樂;潘文良;趙伶羚;孫磊;王小平;陳同生;;蟾酥靈誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)caspase-3活化特性熒光分析[J];深圳大學(xué)學(xué)報(bào)(理工版);2008年03期

7 ;Analysis of in vivo patterns of caspase 3 gene expression in primary hepatocellular carcinoma and its relationship to p21~(WAF1) expression and hepatic apoptosis[J];World Journal of Gastroenterology;2000年03期

8 徐人歡 ,劉靜 ,徐豐 ,江舸 ,謝青 ,周霞秋 ,金由辛 ,王德寶;Activity identification of chimeric anti-caspase-3 mRNA hammerhead ribozyme in vitro and in vivo[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2001年06期

9 黃偉;Caspase研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊(cè);2001年04期

10 崔銀珠;Caspase抑制劑有望成為一類新藥[J];國(guó)外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊(cè));2002年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 Qiang Su;Lang Li;Yang-chun Liu;You Zhou;;Effect of metoprolol on myocardial apoptosis and caspase-9 activation after coronary microembolization in rats[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)心血管病學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2013年

2 韓志君;蔣廷旺;唐裕杰;胡志德;孫懿;周曄;陳燕;谷明莉;鄧安梅;仲人前;;Caspase在原發(fā)性膽汁性肝硬化患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的表達(dá)及其臨床意義[A];全國(guó)臨床免疫檢驗(yàn)研討會(huì)暨第六屆全國(guó)臨床免疫學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

3 葉月芳;周韌;;漢族人群caspase-10基因中可能存在一個(gè)新的微衛(wèi)星位點(diǎn)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2005年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

4 ;Effect of atorvastatin on myocardial apoptosis and caspase-8 activation following coronary microembolization[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

5 ;The Effect of Theanine on the Expression of Survivin,Bax,Caspase-3 in the Hippocampus and the Ability of Spatial Learning and Memory after Global Cerebral Ischemia /Reperfusion in Rats[A];全國(guó)第三次麻醉藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

6 Ki Seong Eom;Gil-Saeng Jeong;Tae Young Kim;;Ophiobolin B inhibits proliferation of glioblastoma U87MG cells by inducing S phase arrest and caspase-dependent apoptosis[A];中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)神經(jīng)腫瘤專業(yè)委員會(huì)第八屆學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

7 鄧常清;唐映紅;李花;陳北陽(yáng);陳瑞芬;;補(bǔ)陽(yáng)還五湯有效部位對(duì)局灶性腦缺血再灌注后caspase表達(dá)的作用[A];第六次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合血瘀證及活血化瘀研究學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2005年

8 鄭世營(yíng);葛錦峰;趙軍;蔣東;紀(jì)勇;邵峰;;Caspase活化的細(xì)胞凋亡在老年非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)[A];第八屆華東六省一市胸心血管外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

9 吳小候;李俊;;Expression of TRAIL and caspase 3 and their significance in rat’s renal ischemia-reperfusion injury[A];第十五屆全國(guó)泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

10 朱秋華;江煥峰;李佳;劉叔文;;新型Caspase-3抑制劑二氫吡咯衍生物的研究[A];第十屆全國(guó)抗炎免疫藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2010年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 一帆;caspase—8缺陷導(dǎo)致免疫紊亂[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張放;阻斷NLRP3炎癥小體中Caspase-1活化治療小鼠急性胃潰瘍的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 程進(jìn);蛋白激酶C在腫瘤再增殖中的作用及作用機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2014年

3 唐楊順;Caspase-1在熱驚厥發(fā)生中的作用及以Caspase-1為靶點(diǎn)的新型小分子抑制劑研究[D];浙江大學(xué);2016年

4 林居強(qiáng);細(xì)胞凋亡過程中caspase蛋白酶激活的光學(xué)成像研究[D];華中科技大學(xué);2006年

5 楊銳;硬脂酰酪氨酸對(duì)非caspase依賴的細(xì)胞損傷的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2013年

6 薛寅佳;小型豬自體移植腎灌注短效Caspase-3小干擾RNA冷保存導(dǎo)致腎損傷加劇的機(jī)制初探[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

7 廖文韜;Tn-IAP1v的結(jié)構(gòu)與功能分析[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2002年

8 徐華;Caspase-3蛋白在重離子輻照肺癌細(xì)胞中的功能研究[D];蘭州大學(xué);2012年

9 賈林濤;靶向性重組caspase-3基因的構(gòu)建、表達(dá)及其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

10 路斌;小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中caspase抑制劑對(duì)caspase活性的影響和對(duì)細(xì)胞凋亡抑制作用的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 薛子成;樺木酸及其衍生物與Caspase-3分子對(duì)接及分子動(dòng)力學(xué)研究[D];哈爾濱理工大學(xué);2014年

2 臧韻;TTF1-NP通過活化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的Caspase通路抑制大鼠原發(fā)性肝癌的生長(zhǎng)[D];延邊大學(xué);2015年

3 胡麗華;四氯苯醌激活Caspase 8/t-Bid誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的信號(hào)通路分析[D];西南大學(xué);2015年

4 董娜;Nestin和活化型caspase-3在狼掩性腎炎腎小球中的表達(dá)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 常貫超;klotho蛋白、Caspase12蛋白在糖尿病腎病中的表達(dá)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 徐彥楠;異牛肝菌素誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞BGC-823凋亡的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 武辰楠;沙利度胺對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞Caspase-3、Bcl-2和BAX mRNA的表達(dá)影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 陳素艷;不同時(shí)間和濃度的常壓氧對(duì)大鼠腦缺血半暗帶細(xì)胞凋亡的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

9 閆文相;Nrf2、Caspase3在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及相關(guān)性[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 劉麗;失僂剌知丸對(duì)腦缺血大鼠再灌注后Caspase-3和Caspase-9表達(dá)的影響[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：634373