本文關(guān)鍵詞：TGF-β對小鼠肺內(nèi)TREM-1表達(dá)的影響及其機制

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【摘要】：髓樣細(xì)胞表達(dá)觸發(fā)受體-1(TREM-1)可通過放大Toll樣受體(TLR)及Nod樣受體(NLR)介導(dǎo)的免疫應(yīng)答信號,延長巨噬細(xì)胞壽命,發(fā)揮炎癥放大作用。TGF-β被公認(rèn)為肺纖維化最為關(guān)鍵的致纖維化因子,TREM-1可顯著上調(diào)TGF-β家族的表達(dá),而TGF-β對TREM-1表達(dá)的影響尚未見報道。 目的： 觀察TGF-β對小鼠肺內(nèi)TREM-1表達(dá)的影響并探討其機制。 方法： Swiss小鼠經(jīng)氣管一次性注射博萊霉素(BLM)15mg/kg復(fù)制肺纖維化模型,分別于第7、14和21天處死。HE染色和Masson染色驗證肺纖維化小鼠模型是否建立成功；Real-time PCR或RT-PCR檢測Ⅰ、Ⅲ型膠原、TGF-β、TREM-1及其轉(zhuǎn)錄因子c-Jun的轉(zhuǎn)錄水平；Western Blot檢測小鼠肺組織TREM-1的蛋白含量；流式細(xì)胞術(shù)檢測含TREM-1的陽性細(xì)胞數(shù),以反映小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1的蛋白水平；定點突變技術(shù)和雙熒光素酶報告基因試驗證明轉(zhuǎn)錄因子c-Jun參與TGF-β上調(diào)小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1表達(dá)的轉(zhuǎn)錄機制。結(jié)果： 肺纖維化小鼠模型建立成功。小鼠肺組織TGF-β和TREM-1表達(dá)在BLM組第7、14和21天均增加(P0.05),且二者呈正相關(guān)(r=0.787,P0.05)。TGF-β呈時間和劑量依賴性上調(diào)小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1mRNA和蛋白水平(P0.05)。小鼠肺組織c-Jun mRNA表達(dá)在BLM組第7、14和21天增加(P0.05),且分別與TGF-β(r=0.713,P0.05)、TREM-1的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.906,P0.05)。TGF-p呈時間和劑量依賴性上調(diào)小鼠巨噬細(xì)胞c-Jun mRNA表達(dá)(P0.05)。定點突變技術(shù)和雙熒光素酶報告基因試驗結(jié)果顯示：TGF-β刺激顯著增加TREM-1野生型質(zhì)粒的相對熒光強度(P0.05),而對TREM-1突變型質(zhì)粒(TREM-1的AP-1位點定點突變)無明顯影響(P0.05)。PKC抑制劑H-7、CaM抑制劑W-7及MAPK抑制劑PD98059顯著逆轉(zhuǎn)TGF-β誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1mRNA和蛋白水平的上調(diào)(P0.05)。 結(jié)論： 1.TREM-1在肺纖維化小鼠肺組織中表達(dá)增加。 2.肺纖維化小鼠肺組織TGF-β與TREM-1的表達(dá)呈正相關(guān)。 3.TGF-β上調(diào)小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1表達(dá),其機制通過PKC、CaM及MAPK信號通路增加TREM-1的轉(zhuǎn)錄因子c-Jun水平。
【關(guān)鍵詞】：肺纖維化 TGF-β TREM-1 c-Jun
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略詞表10-11
• 前言11-12
• 1 材料與方法12-35
• 1.1 實驗材料12-14
• 1.1.1 實驗動物12
• 1.1.2 細(xì)胞12
• 1.1.3 主要試劑12-13
• 1.1.4 常用緩沖液配制13-14
• 1.1.5 主要儀器14
• 1.2 實驗方法14-35
• 1.2.1 小鼠肺纖維化模型的復(fù)制14-15
• 1.2.2 小鼠肺組織形態(tài)學(xué)觀察15-16
• 1.2.3 RT-PCR或Real-time PCR檢測小鼠肺內(nèi)和巨噬細(xì)胞目的基因mRNA的表達(dá)16-20
• 1.2.4 Western Blot檢測小鼠肺組織TREM-1蛋白含量20-24
• 1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠巨噬細(xì)胞表面TREM-1蛋白水平24-25
• 1.2.6 定點突變與質(zhì)粒構(gòu)建25-30
• 1.2.7 質(zhì)粒抽提及陽性克隆的鑒定30-32
• 1.2.8 轉(zhuǎn)染與雙熒光素酶報告基因試驗32-34
• 1.2.9 統(tǒng)計學(xué)分析34-35
• 2 結(jié)果35-56
• 2.1 肺纖維化小鼠肺組織TREM-1的表達(dá)35-39
• 2.1.1 小鼠肺組織HE染色35
• 2.1.2 小鼠肺組織Masson染色35-36
• 2.1.3 小鼠肺組織Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA水平的變化36-37
• 2.1.4 小鼠肺組織TGF-β mRNA水平的變化37-38
• 2.1.5 小鼠肺組織TREM-1表達(dá)的變化38-39
• 2.2 TGF-B對小鼠肺內(nèi)TREM-1表達(dá)的影響39-42
• 2.2.1 小鼠肺組織TGF-β與TREM-1表達(dá)之間的相關(guān)性分析39-40
• 2.2.2 TGF-β不同時間刺激小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1表達(dá)的改變40-41
• 2.2.3 不同劑量TGF-β刺激小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1表達(dá)的改變41-42
• 2.3 TGF-B對小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1表達(dá)影響的機制42-56
• 2.3.1 TGF-β上調(diào)TREM-1與c-Jun的關(guān)系42-45
• 2.3.2 TREM-1野生型和突變型質(zhì)粒的構(gòu)建45-52
• 2.3.3 轉(zhuǎn)錄因子c-Jun與TREM-1啟動子的結(jié)合活性檢測52
• 2.3.4 PKA、PKC、CaM和MAPK信號通路抑制劑對TGF-β刺激小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1表達(dá)的影響52-54
• 2.3.5 不同信號通路抑制劑對TGF-β刺激小鼠巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子c-Jun轉(zhuǎn)錄水平的影響54-56
• 3 討論56-59
• 4 結(jié)論59-60
• 綜述60-68
• 參考文獻(xiàn)68-79
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果79-84
• 在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文和會議摘要79-82
• 在讀期間主持和參與的課題82-83
• 在讀期間獲得獎項83-84
• 致謝84

【共引文獻(xiàn)】

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