本文關鍵詞：舒林酸抗肺纖維化的作用及其對STAT3相關miR-21表達抑制

  更多相關文章： 肺纖維化 舒林酸 STAT3 IFN-γ EMT miR-21

【摘要】：目的：探討舒林酸(sulindac)通過抑制IFN-y誘導的STAT3/p-STAT3通路相關miRNA-21表達緩解肺纖維化損傷的機制。方法：用博萊霉素誘導構建大鼠肺纖維化模型,轉化生長因子(TGF-1)誘導A549細胞發(fā)生上皮間充質轉化(EMT)構建肺纖維化細胞模型,用舒林酸、IFN-γ、AG490干預及miR-21轉染。倒置顯微鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡觀察細胞形態(tài)及E-cadherin、α-SMA的表達；western blot檢測EMT標志性蛋白E-cadherin、α-SMA和Stat3/p-Stat3的表達變化；IHC、ELISA檢測IFN-γ表達；RT-qPCR檢測miR-21表達。結果：舒林酸治療組大鼠肺干濕比、肺泡間隔增寬、膠原沉積等指標較博萊霉素誘導肺纖維化模型組減弱。舒林酸抑制TGF-β1誘導的A549細胞EMT形態(tài)學變化,且上調E-cadherin表達,下調a-SMA表達逆轉EMT。舒林酸減弱肺纖維化中IFN-Y表達；IFN-γ以劑量依賴方式上調Stat3及p-Stat3表達；舒林酸下調Stat3及p-Stat3表達；舒林酸抑制IFN-γ誘導的STAT3信號通路。miR-21是STAT3信號通路下游miRNA;舒林酸下調miR-21表達; IFN-γ上調miR-21表達；miR-21誘導A549細胞發(fā)生EMT形態(tài)學變化,且下調E-cadherin表達,上調α-SMA表達促EMT；舒林酸抑制miR-21誘導的A549細胞EMT形態(tài)學變化,且上調E-cadherin表達,下調a-SMA表達逆轉EMT。結論：舒林酸緩解肺纖維化發(fā)生,可能與抑制IFN-γ誘導的STAT3/p-STAT3信號通路的活化進而下調通路下游miR-21表達有關。
【關鍵詞】：肺纖維化 舒林酸 STAT3 IFN-γ EMT miR-21
【學位授予單位】：濱州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R563.9
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 縮略詞表9-10
• 前言10-16
• 參考文獻11-16
• 第一部分 探討舒林酸是否具有抗肺纖維化作用16-30
• Part1 舒林酸在BLM誘導大鼠肺纖維化損傷中的作用16-25
• 1 實驗材料16-17
• 1.1 實驗動物16
• 1.2 主要實驗試劑16
• 1.3 主要儀器16
• 1.4 常用試劑配制16-17
• 2 實驗方法17-22
• 2.1 動物模型分組與模型制備17-18
• 2.2 動物模型取材18
• 2.3 石蠟切片制備18
• 2.4 HE染色18-19
• 2.5 Masson染色19
• 2.6 羥脯氨酸檢測19-20
• 2.7 Western blotting檢測E-cadherin、α-SMA的表達變化20-22
• 3 統(tǒng)計分析22
• 4 實驗結果22-25
• 4.1 HE染色觀察大鼠肺組織形態(tài)改變22
• 4.2 Masson染色觀察大鼠肺組織的膠原表達22-23
• 4.3 大鼠肺組織膠原的定量表達23
• 4.4 大鼠肺組織HYP含量檢測23-24
• 4.5 Western blotting檢測sulindac對大鼠肺組織E-cadherin、a-SMA表達影響24-25
• Part2 舒林酸逆轉A549細胞的EMT過程25-30
• 1 實驗材料25-26
• 1.1 細胞系25
• 1.2 主要實驗試劑25
• 1.3 主要儀器25
• 1.4 常用試劑配制25-26
• 2 實驗方法26-27
• 2.1 A549細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代及凍存26
• 2.2 細胞加藥實驗26-27
• 3 統(tǒng)計分析27
• 4 實驗結果27-30
• 4.1 Western blotting檢測TGF-β1誘導的A549細胞E-cadherin、a-SMA表達變化27
• 4.2 A549細胞sulindac干預后細胞形態(tài)學觀察27-28
• 4.3 Western blotting檢測A549細胞sulindac干預后E-cadherin、α-SMA表達變化28-30
• 第二部分 探討舒林酸抗肺纖維化的可能機制30-53
• Part1 舒林酸對肺纖維化中IFN-γ表達的影響30-36
• 1 實驗材料30
• 1.1 實驗動物30
• 1.2 細胞系30
• 1.3 主要實驗試劑30
• 1.4 主要儀器30
• 1.5 常用試劑配制30
• 2 實驗方法30-32
• 2.1 動物模型分組與模型制備31
• 2.2 動物模型取材31
• 2.3 石蠟切片制備31
• 2.4 免疫組化31-32
• 2.5 Western blotting檢測IFN-γ因子的表達變化32
• 2.6 A549細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代及凍存32
• 2.7 細胞加藥實驗32
• 2.8 酶聯(lián)免疫吸附實驗32
• 3 統(tǒng)計分析32
• 4 實驗結果32-36
• 4.1 IHC觀察sulindac對大鼠肺組織IFN-γ表達影響32-33
• 4.2 IHC檢測sulindac對大鼠肺組織IFN-γ表達影響的IOD分析33-34
• 4.3 Western Blotting檢測sulindac對大鼠肺組織IFN-γ表達影響34
• 4.4 ELISA檢測sulindac對A549細胞IFN-γ表達的影響34-36
• Part2 舒林酸對IFN-γ誘導的STAT3信號通路的抑制36-40
• 1 實驗材料36
• 1.1 實驗動物36
• 1.2 細胞系36
• 1.3 主要實驗試劑36
• 1.4 主要儀器36
• 1.5 常用試劑配制36
• 2 實驗方法36-37
• 2.1 動物模型分組與模型制備36
• 2.2 動物模型取材36
• 2.3 A549細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代及凍存36-37
• 2.4 細胞加藥實驗37
• 2.5 Western blotting檢測stat3、P-stat3的表達變化37
• 3 統(tǒng)計分析37
• 4 實驗結果37-40
• 4.1 Western Blotting檢測sulindac對大鼠肺組織stat3、P-stat3表達影響37
• 4.2 Western Blotting檢測IFN-γ干預的A549細胞stat3、P-stat3表達改變37-38
• 4.3 Western Blotting檢測IFN-γ、AG490干預的A549細胞stat3、P-stat3表達改變38
• 4.4 Western Blotting檢測sulindac、AG490干預的A549細胞stat3、P-stat3表達改變38-40
• Part3 miR-21對A549細胞的EMT的影響40-44
• 1 實驗材料40
• 1.1 細胞系40
• 1.2 主要實驗試劑40
• 1.3 主要儀器40
• 1.4 常用試劑配制40
• 2 實驗方法40-41
• 2.1 A549細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代及凍存40
• 2.2 miRNA化學合成40
• 2.3 細胞轉染實驗40-41
• 2.4 Western blotting檢測E-cadherin、a-SMA的表達變化41
• 3 統(tǒng)計分析41
• 4 實驗結果41-44
• 4.1 A549細胞miR-21轉染后細胞形態(tài)學觀察41-42
• 4.2 Western blotting檢測A549細胞miR-21轉染后E-cadherin、α-SMA表達變化42-44
• Part4 舒林酸減弱STAT3信號通路相關miR-21的表達44-49
• 1 實驗材料44
• 1.1 實驗動物44
• 1.2 細胞系44
• 1.3 主要實驗試劑44
• 1.4 主要儀器44
• 1.5 常用試劑配制44
• 2 實驗方法44-46
• 2.1 動物模型分組與模型制備44
• 2.2 動物模型取材44
• 2.3 A549細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代及凍存44
• 2.4 細胞加藥實驗44-45
• 2.5 組織及細胞RNA提取45
• 2.6 miR-21的加尾及反轉錄45-46
• 2.7 PCR反應46
• 3 統(tǒng)計分析46
• 4 實驗結果46-49
• 4.1 QRT-PCR檢測sulindac對大鼠肺組織miR-21表達影響46-47
• 4.2 QRT-PCR檢測IFN-γ、AG490干預的A549細胞miR-21表達改變47
• 4.3 QRT-PCR檢測sulindac、AG490干預的A549細胞miR-21表達改變47-49
• Part5 舒林酸抑制miR-21誘導的EMT49-53
• 1 實驗材料49
• 1.1 細胞系49
• 1.2 主要實驗試劑49
• 1.3 主要儀器49
• 1.4 常用試劑配制49
• 2 實驗方法49-50
• 2.1 A549細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代及凍存49
• 2.2 細胞加藥實驗49
• 2.3 Western blotting檢測E-cadherin、a-SMA的表達變化49-50
• 2.4 Immunofluorescence檢測E-cadherin、a-SMA的表達變化50
• 3 統(tǒng)計分析50
• 4 實驗結果50-53
• 4.1 A549細胞sulindac及miR-21干預后細胞形態(tài)學觀察50
• 4.2 Western blotting檢測A549細胞sulindac及miR-21干預后E-cadherin、α-SMA表達變化50-51
• 4.3 Immunofluorescence檢測A549細胞sulindac及miR-21干預后E-cadherin、α-SMA表達變化51-53
• 討論53-55
• 參考文獻55-57
• 文獻綜述 γ干擾素在特發(fā)性肺纖維化中的相關研究進展57-65
• 1 IFN-γ概述58
• 2 IFN-γ與IPF相關信號通路58-59
• 3 IFN-γ與IPF相關miRNA表達59-60
• 4 IFN-γ與IPF過程中血管再生60
• 5 IFN-γ與Th1/Th2型細胞因子平衡60-61
• 6 IFN-γ治療IPF的探索61-62
• 參考文獻62-65
• 致謝65-66
• 研究生期間發(fā)表的文章66

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李曉莉;何剪太;張陽德;劉樺;陳子華;葛杰;;舒林酸聯(lián)合內鏡下高頻電切治療家族性腺瘤性息肉病的臨床研究[J];第四軍醫(yī)大學學報;2008年16期

2 王琴;;舒林酸治療家族性腺瘤性息肉病[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);1993年04期

3 李軍,呂愈敏,顧芳,安燕芳,錢躍清;舒林酸長期治療家族性腺瘤性息肉病的臨床研究[J];中華消化雜志;2005年03期

4 李傳鳳;呂愈敏;倪菊華;李軍;;體外過氧化物酶體增殖物激活受體-γ在舒林酸抗大腸腫瘤機制中的作用[J];北京大學學報(醫(yī)學版);2007年01期

5 鞏新建;劉軍權;陳復興;李璽;費素娟;唐濤;;舒林酸對人γδT細胞的作用研究[J];南京醫(yī)科大學學報(自然科學版);2007年07期

6 張正水;趙艷;梁桃;;舒林酸對人胃癌原位移植模型作用的實驗研究[J];中國臨床醫(yī)學;2008年03期

7 劉放;毛麗珍;黃衛(wèi)平;;高效液相色譜法測定舒林酸片中舒林酸含量[J];現(xiàn)代應用藥學;1993年04期

8 徐三榮;舒林酸在家族性腺瘤性息肉病治療中的應用[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);1994年03期

9 陸瑋;舒林酸不能預防家族性結腸息肉病患者直腸段腺癌[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);1995年02期

10 陳曉嵐,屈凌波,熊冬生;高效液相色譜法測定血漿中舒林酸及其代謝物的濃度[J];河南醫(yī)科大學學報;1997年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 柳汝明;吳斌;唐堯;;舒林酸治療結直腸息肉有效性及安全性的系統(tǒng)評價[A];2010年臨床藥學學術年會暨第六屆臨床藥師論壇論文集[C];2010年

2 張耀朋;呂愈敏;李軍;顧芳;李傳鳳;;PPARγ在舒林酸干預治療大腸癌前病變中的作用[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編（下冊）[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 記者 張建琛　通訊員 李靜 洪昀;廈大生物醫(yī)科院發(fā)現(xiàn)新型抗癌藥物分子[N];科技日報;2010年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李曉莉;家族性腺瘤性息肉病腺瘤干細胞的研究以及高頻電切對家族性腺瘤性息肉病的治療作用[D];中南大學;2009年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周雪;舒林酸抗肺纖維化的作用及其對STAT3相關miR-21表達抑制[D];濱州醫(yī)學院;2015年

2 張曉明;舒林酸親水凝膠緩釋骨架片的研究[D];沈陽藥科大學;2009年

3 聶家艷;舒林酸體外抗結腸腫瘤作用的實驗研究[D];廣西醫(yī)科大學;2008年

4 賀電;舒林酸的合成研究[D];浙江大學;2008年

5 沙麗穎;舒林酸在中國健康男性體內的藥代動力學及相對生物利用度研究[D];青島大學;2003年

6 范學科;舒林酸經(jīng)survivin/Aurora B/Op18途徑對人胰腺癌細胞增殖的阻斷效應[D];華中科技大學;2008年

7 劉軍;舒林酸對結腸癌細胞NF-κB信號通路的干預作用及機制探討[D];濟南大學;2014年

8 曲春暉;舒林酸對結腸癌細胞HT-29增殖、凋亡及β-catenin蛋白表達的影響[D];暨南大學;2011年

9 邢寅雪;舒林酸對實驗性腦缺血大鼠的神經(jīng)保護作用及其通過上調Wnt/β-catenin信號通路發(fā)揮作用的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2012年

10 黃偉平;舒林酸對HBV X基因轉染的人肝癌SMMC7721細胞系Wnt信號通路的影響[D];福建醫(yī)科大學;2010年

，

本文編號：536626