本文關(guān)鍵詞：蘿卜硫素對肺氣腫大鼠肺泡巨噬細(xì)胞分泌TNF-α的影響

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【摘要】：目的:探討蘿卜硫素(Sulforaphane,SFN)對肺氣腫大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(alveolar macrophage,AM)分泌腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)的影響。方法:1.肺氣腫大鼠模型構(gòu)建:采用脂多糖聯(lián)合熏煙法構(gòu)建模型。取SPF級成年雄性wistar大鼠18只,隨機(jī)分為對照組(6只)和模型組(12只)。模型組大鼠分別于d1、d14氣管內(nèi)滴注200μg脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS;生理鹽水配制成200μg/200μL溶液),第2~60天(除d14)在自制熏煙箱被動吸香煙,2次/日,12支/次,30min/次,持續(xù)8周;對照組大鼠以生理鹽水替代脂多糖行氣管滴注,正常空氣吸入。8周后,取各組大鼠右肺后葉做病理切片,HE染色光鏡下觀察,鑒定模型;2.原代肺泡巨噬細(xì)胞提取及干預(yù):造模成功后,兩組大鼠均行支氣管肺泡灌洗(bronchoalveolar lavage,BAL),取灌洗液行細(xì)胞計(jì)數(shù),提取、純化AM,用不同濃度SFN(0μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L)干預(yù)肺氣腫大鼠AM 16 h。依處理方法不同,將AM分為五組:對照組、SFN0組、SFN5組、SFN10組和SFN20組;3.實(shí)驗(yàn)室檢測:3.1采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α含量;3.2采用蛋白印跡法(Western blot)分別檢測各組AM中轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2)及其下游的靶基因醌氧化還原酶1(NQO1)、血紅素氧合酶-1(HO1)蛋白相對表達(dá)量;3.3采用western blot法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q RT-PCR)法分別檢測各組AM中核因子(Nuclear factor,NF)-κB蛋白及其m RNA表達(dá)水平。結(jié)果:1.造模前對照組與模型組大鼠體重比較無明顯差異(211.97±8.71 g VS 206.32±6.52 g,p0.05)。經(jīng)熏煙8周后,模型組大鼠體重較對照組顯著下降(567.48±24.38 g VS 358.86±20.75 g,P0.01);2.模型組大鼠支氣管肺泡灌洗液(broncho alveolar lavage fluid,BALF)中白細(xì)胞總數(shù)及AM比例均較對照組顯著增加,分別為(2.79±0.42)×106/m L,(98.7±1.0)%和(0.77±0.16)×106/m L,(90.0±2.5)%(均P0.001);3.TNF-α在SFN各濃度組中含量均高于對照組(對照組:12.2±2.7pg/m L;SFN0:150.7±11.0 pg/m L;SFN5:133.1±13.7pg/m L;SFN10:65.3±14.8pg/m L;SFN20:48.2±11.1 pg/m L),且隨SFN干預(yù)濃度增加,TNF-α含量呈逐漸下降(均P0.05);4.與對照組相比,SFN0組Nrf2蛋白胞核表達(dá)減少,胞漿表達(dá)增加(均P0.05),隨SFN干預(yù)濃度增加,Nrf2胞核表達(dá)量逐漸增加,胞漿相應(yīng)減少(均P0.05);5.與對照組相比,SFN0組NQO1、HO1蛋白表達(dá)減少;隨SFN干預(yù)濃度增加,NQO1、HO1蛋白表達(dá)逐漸增加(均P0.05),且NQO1、HO1表達(dá)量與各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α含量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.918,P0.01;r=-0.939,P0.01);6.對照組AM中NF-κB蛋白的胞漿表達(dá)大于胞核。與對照組相比,SFN0組NF-κB蛋白胞核表達(dá)顯著增加,胞漿表達(dá)減少(均P0.05);隨SFN干預(yù)濃度增加,NF-κB胞核表達(dá)逐漸減少,胞漿表達(dá)相應(yīng)增加(均P0.05);7.與對照組相比,SFN各濃度組NF-κB m RNA表達(dá)水平均高于對照組(均P0.05),但SFN各濃度組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1.蘿卜硫素抑制肺氣腫大鼠肺泡巨噬細(xì)胞釋放TNF-α;2.蘿卜硫素通過促進(jìn)Nrf2核內(nèi)移,增加下游靶基因NQO1、HO1轉(zhuǎn)錄表達(dá),從而抑制AM釋放TNF α;3.蘿卜硫素通過減少NF-κB核內(nèi)移,從而抑制AM釋放TNF-α。
【關(guān)鍵詞】：蘿卜硫素 肺氣腫 肺泡巨噬細(xì)胞(AM) 腫瘤壞死因子(TNF)-α NF κB
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R563.3
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 1 材料與方法13-24
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法15-23
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理23-24
• 2 結(jié)果24-30
• 2.1 兩組大鼠體重變化24
• 2.2 肺組織HE染色結(jié)果24-25
• 2.3 BALF中細(xì)胞分類計(jì)數(shù)比較25
• 2.4 各組肺泡巨噬細(xì)胞的活力、純度鑒定25
• 2.5 各組AM培養(yǎng)上清液TNF-A含量比較25-26
• 2.6 各組AM中NRF2 蛋白表達(dá)水平26-27
• 2.7 各組AM中抗氧化因子NQO1、HO1 蛋白表達(dá)水平及TNF-A含量的相關(guān)性檢測27-28
• 2.8 各組AM中NF-ΚB蛋白及MRNA表達(dá)水平28-30
• 3 討論30-35
• 4 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-41
• 綜述41-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 致謝52-53
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果53-54
• 個(gè)人簡歷54

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