本文關(guān)鍵詞：非肺孢子菌肺炎患者呼吸道標(biāo)本耶氏肺孢子菌檢出情況，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的調(diào)查耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)特異性核酸片段在非肺孢子菌肺炎(non-Pneumocystis pneumonia,non-PCP)患者呼吸道標(biāo)本的檢出情況。方法利用確診肺孢子菌肺炎患者的呼吸道標(biāo)本提取DNA,以線粒體大亞基核糖體核糖核酸(Mitochondrial large subunit r RNA,mt LSUr RNA)和主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,Msg)為目的基因設(shè)計(jì)引物、PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物克隆測(cè)序,并在美國國立生物技術(shù)信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)上進(jìn)行比對(duì),獲得陽性標(biāo)準(zhǔn)品。應(yīng)用常規(guī)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)、巢式PCR(Nest PCR,n PCR)和定量PCR(Quantitative PCR,q PCR)方法,分別以mt LSUr RNA為靶基因建立常規(guī)PCR(Mt-PCR)和巢氏PCR(Mt-n PCR),以Msg為靶基因建立常規(guī)PCR(Msg-PCR),入選腦瘤手術(shù)患者咽喉部吸取液及支氣管鏡檢查患者獲得的支氣管肺泡灌洗液(Bronchial Alveolar Lavage Fluid,BALF),以國際通用PCP診斷標(biāo)準(zhǔn)入選non-PCP人群的咽喉部及肺部標(biāo)本,調(diào)查該人群呼吸道標(biāo)本Pj特異性核酸片段的檢出率。對(duì)PCR或n PCR檢出為陽性的呼吸道樣本,進(jìn)一步利用q PCR的方法,分別以mt LSUr RNA和Msg為靶基因,調(diào)查non-PCP人群呼吸道標(biāo)本中Pj的靶基因拷貝數(shù)量。結(jié)果Pj Msg基因克隆測(cè)序的結(jié)果有57條,與NCBI基因庫中的Pj Msg A(Gen Bank AAL67137)比對(duì)一致率范圍為55%-100%。Pj mt LSUr RNA基因克隆測(cè)序的結(jié)果有1條,與NCBI基因庫中的Pj mt LSUr RNA(Gen Bank JX855937.1)比對(duì)一致率為99%。在108例咽喉部吸取液樣本中,Mt-n PCR、Msg-PCR及Mt-PCR的檢出率分別為41.7%(45/108)、15.7%(17/108)和4.6%(5/108),其中三種檢測(cè)方法均為陽性的有1例(1%),任意兩種方法陽性的有11例(10%),任意一種方法陽性的有42例(39%),三種方法均為陰性的有54例(50%)。對(duì)54例PCR檢測(cè)結(jié)果為陽性的標(biāo)本分別進(jìn)行mt LSUr RNA定量PCR(Mt-q PCR)和Msg定量PCR(Msg-q PCR)檢測(cè),其中Mt-q PCR檢測(cè)結(jié)果為:103拷貝/μl-104拷貝/μl的占90.7%;Msg-q PCR檢測(cè)結(jié)果為:103拷貝/μl-105拷貝/μl的占90.7%。男女性別比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為0.017、0.01和2.131,均P0.05)。年齡比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為0.988、2.350和2.514,均P0.05)。在50例BALF樣本中,Mt-n PCR、Msg-PCR及Mt-PCR的檢出率分別為56%(28/50)、26%(13/50)和36%(18/50),其中三種檢測(cè)方法均為陽性的有5例(10%),任意兩種方法陽性的有13例(26%),任意一種方法陽性的有18例(36%),三種方法均為陰性的有14例(28%)。對(duì)36例PCR檢測(cè)結(jié)果為陽性的標(biāo)本分別進(jìn)行Mt-q PCR和Msg-q PCR檢測(cè),其中Mt-q PCR檢測(cè)結(jié)果為:103拷貝/μl-104拷貝/μl的占100%;Msg-q PCR檢測(cè)結(jié)果為:103拷貝/μl-106拷貝/μl的占91.7%。男女性別比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為0.253、0.402和0.573,均P0.05)。年齡比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為0.879、1.203和0.387,均P0.05)。結(jié)論在non-PCP人群中,咽喉部吸取液及BALF標(biāo)本中Pj檢出率分別為50%和72%,Mt-q PCR拷貝數(shù)主要位于103拷貝/μl至104拷貝/μl,Msg-q PCR拷貝數(shù)主要位于103拷貝/μl至106拷貝/μl。呼吸道標(biāo)本用核酸擴(kuò)增方法檢測(cè)出Pj時(shí)臨床意義解讀需要謹(jǐn)慎。
【關(guān)鍵詞】：非肺孢子菌肺炎 耶氏肺孢子菌 常規(guī)PCR 巢氏PCR 定量PCR
【學(xué)位授予單位】：首都醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R519.8
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 1．國內(nèi)外研究現(xiàn)狀10-11
• 2．本課題的研究設(shè)計(jì)11-13
• 材料與方法13-18
• 1．實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 1.1 臨床資料13-14
• 1.2 主要試劑14
• 1.3 主要儀器14-15
• 2．實(shí)驗(yàn)方法15-18
• 2.1 標(biāo)本采集15
• 2.2 引物合成15-16
• 2.3 DNA提取16
• 2.4 n PCR16
• 2.5 常規(guī)PCR16-17
• 2.6 q PCR17
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理17-18
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-24
• 1．靶基因擴(kuò)增18-19
• 2．不同性別及年齡患者PCR陽性率比較19-21
• 3．q PCR結(jié)果21-24
• 討論24-26
• 結(jié)論26-27
• 參考文獻(xiàn)27-30
• 文獻(xiàn)綜述30-39
• 綜述參考文獻(xiàn)36-39
• 附錄 縮略語一覽表39-40
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況40-41
• 致謝41-42
• 個(gè)人簡歷42

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本文編號(hào)：478423