本文關(guān)鍵詞：鈣激活氯離子通道對哮喘氣道杯狀細胞凋亡與黏液高分泌的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：支氣管哮喘（哮喘）是一種常見的氣道慢性炎癥性疾病，以氣道高反應性和氣道黏液高分泌為主要病理生理特征，發(fā)病率較高且花費巨大。哮喘中黏液高分泌阻塞氣道導致氣流受限，是第1秒用力呼氣量（FEV1）下降加速的獨立危險因素，成為重癥哮喘的主要死因。但目前針對消除黏液高分泌尚無有效的控制手段，臨床亟需新的治療策略。氣道杯狀細胞增生是導致黏液高分泌的重要病理基礎(chǔ)。在哮喘患者研究中證實氣道杯狀細胞凋亡減少，特異性高表達人鈣激活氯離子通道I型（humencalcium-activated chloride channel1, hCLCA1），與氣道杯狀細胞增生、黏液高分泌密切相關(guān)；在進一步的研究發(fā)現(xiàn)，哮喘小鼠模型中同源異種鈣激活氯離子通道III型（murine calcium-activated chloride channel type3, mCLCA3）表達與氣道杯狀細胞增生、黏液高分泌密切相關(guān)，且可通過凋亡途徑減少增多的杯狀細胞以恢復原有平衡。故杯狀細胞中CLCA表達與凋亡均是調(diào)控哮喘黏液高分泌的有效靶點，二者之間可能存在一定關(guān)聯(lián)，通過特異性阻斷CLCA，改變氣道杯狀細胞內(nèi)外生理特性，可能會對杯狀細胞凋亡及黏液分泌產(chǎn)生一定作用，達到治療黏液高分泌目的。 目的： 觀察哮喘小鼠和哮喘患者氣道杯狀細胞mCLCA3和hCLCA1的表達及凋亡情況，并分析二者之間及其與氣道黏液高分泌的關(guān)系；經(jīng)鼻氣道內(nèi)滴入mCLCA3單克隆抗體，觀察其對哮喘小鼠氣道杯狀細胞凋亡及氣道黏液分泌的影響，為以CLCA為靶點誘導杯狀細胞凋亡的哮喘黏液高分泌的治療提供實驗依據(jù)。 方法： 1.支氣管鏡活檢收集10例哮喘患者和10例正常人氣道上皮組織標本，通過HE染色、PAS染色、免疫組化、TUNEL和RT-PCR等方法比較兩組氣道杯狀細胞數(shù)量、凋亡和凋亡蛋白分布及氣道組織MUC5AC和hCLCA1mRNA表達水平。 2.80只BALB/c小鼠以腹腔注射卵白蛋白致敏，隨后按激發(fā)天數(shù)隨機分為16組：A~P組，通過HE染色、PAS染色、免疫組化、TUNEL、RT-PCR和ELISA等方法比較不同激發(fā)天數(shù)組小鼠肺組織mCLCA3和MUC5AC mRNA表達、mCLCA3和凋亡相關(guān)蛋白分布、氣道杯狀細胞數(shù)量與凋亡、BALF中MUC5AC含量變化。 3.30只BALB/c小鼠隨機分為3組：對照小鼠組，哮喘小鼠組，mCLCA3抗體干預組。后兩組建立哮喘模型，干預組經(jīng)鼻給予mCLCA3單克隆抗體干預。通過HE染色、PAS染色、免疫組化、TUNEL和ELISA等方法評估各組小鼠氣道黏液分泌、氣道杯狀細胞數(shù)量與凋亡等情況。 結(jié)果： 1.哮喘患者氣道杯狀細胞比例和Bcl-2+杯狀細胞比例分別為0.456±0.072和0.372±0.068，明顯高于健康對照組(分別為0.230±0.051，0.233±0.044，P均＜0.05)，其Bax+杯狀細胞比例和凋亡杯狀細胞比例分別為0.152±0.033和0.022±0.009則明顯低于對照組(分別為0.606±0.081，0.076±0.015，P均＜0.05)；哮喘患者氣道組織高表達hCLCA1mRNA(0.219±0.043)，而對照組幾乎無表達；哮喘患者氣道組織MUC5ACmRNA表達(0.603±0.150)高于對照組(0.190±0.095，P0.05)；哮喘組中氣道組織hCLCA1mRNA表達水平與杯狀細胞比例呈正相關(guān)(r=0.67，P0.05)，與MUC5ACmRNA表達水平呈正相關(guān)(r=0.71，P0.05)；兩組中凋亡杯狀細胞比例Bax+杯狀細胞比例呈正相關(guān)(r=0.62，P0.05)，與Bcl-2+杯狀細胞比例呈負相關(guān)(r=-0.59，P0.05)，與氣道杯狀細胞比例呈負相關(guān)（r=-0.477，P0.05)。 2.小鼠氣道杯狀細胞比例隨激發(fā)時間逐漸增加，第7天（H組）達最多，可維持到第10天（K組），，隨后逐漸減少。H組、K組、P組（激發(fā)15天）氣道杯狀細胞比例分別為0.910±0.140，0.896±0.091，0.460±0.150，明顯多于無激發(fā)A組(0.0700±0.035， P均＜0.05)；H組氣道杯狀細胞mCLCA3蛋白表達較高，而A組幾乎無表達；H組、K組、P組Bax+氣道杯狀細胞比例分別為0.201±0.055、0.358±0.103和0.443±0.192，明顯高于A組(0.103±0.021， P均＜0.05)；H組、K組、P組Bcl-2+氣道杯狀細胞比例分別為0.252±0.044、0.204±0.090和0.096±0.041，明顯低于A組(0.301±0.082，P均＜0.05)；H組、K組、P組氣道上皮細胞凋亡比例分別為0.107±0.033、0.175±0.048和0.251±0.103，明顯高于A組(0.024±0.009，P均＜0.05)；H、K、P組小鼠氣道組織中mCLCA3mRNA水平與MUC5AC mRNA水平呈正相關(guān)(r=0.81，P＜0.05)；各組小鼠氣道杯狀細胞Bax+比例與凋亡比例呈正相關(guān)(r=0.73，P＜0.05)；各組小鼠氣道杯狀細胞Bcl-2+比例與凋亡比例呈負相關(guān)(r=-0.51，P＜0.05)；各組小鼠BALF中MUC5AC含量與氣道杯狀細胞凋亡比例呈負相關(guān)(r=-0.69，P＜0.05)。 3.單抗治療組氣道杯狀細胞比例為0.665±0.067，明顯低于哮喘組(0.896±0.091，P0.05)，氣道杯狀細胞凋亡比例為0.310±0.059，明顯高于哮喘組(0.177±0.050，P0.05)，Bax+氣道杯狀細胞比例為0.411±0.095，明顯高于哮喘組（0.252±0.062，P0.05），Bcl-2+氣道杯狀細胞比例為0.145±0.044，明顯低于哮喘組（0.220，±0.032）；氣道BALF中MUC5AC含量為5.9±1.9ng/mL，明顯低于哮喘組（14.7±4.8ng/mL，P0.05)。 結(jié)論： 1.哮喘患者氣道上皮組織特異性高表達hCLCA1，杯狀細胞凋亡減少，與杯狀細胞增生及黏液高分泌密切相關(guān)。 2.哮喘小鼠氣道杯狀細胞特異性表達mCLCA3，與杯狀細胞增生及黏液高分泌密切相關(guān)；持續(xù)激發(fā)使氣道杯狀細胞數(shù)量增多至峰值后，哮喘小鼠氣道杯狀細胞Bax蛋白表達增多，而Bcl-2蛋白表達降低，通過凋亡減少杯狀細胞數(shù)量。 3.通過單克隆抗體阻斷哮喘小鼠氣道杯狀細胞中mCLCA3生物學活性，可誘導凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2表達變化，促進杯狀細胞凋亡，抑制黏液高分泌。
【關(guān)鍵詞】：哮喘 黏液高分泌 杯狀細胞 凋亡 鈣激活氯離子通道 Bax Bcl-2
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-15
• 前言15-16
• 文獻回顧16-30
• 第一部分 哮喘患者氣道杯狀細胞 hCLCA1 表達、凋亡與氣道黏液高分泌30-42
• 1 研究對象與材料30-33
• 2 方法33-38
• 3 結(jié)果38-40
• 4 討論40-42
• 第二部分 哮喘小鼠氣道杯狀細胞 mCLCA3 表達、凋亡與氣道黏液高分泌42-53
• 1 材料與研究對象42-43
• 2 方法43-47
• 3 結(jié)果47-50
• 4 討論50-53
• 第三部分 mCLCA3單克隆抗體對哮喘小鼠氣道杯狀細胞凋亡及黏液高分泌的影響53-60
• 1 研究對象與材料53
• 2 方法53-55
• 3 結(jié)果55-58
• 4 討論58-60
• 小結(jié)60-61
• 參考文獻61-73
• 個人簡歷和研究成果73-74
• 致謝74

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 鄒麗萍;杜文麗;張艷;王利霞;;穿孔素和顆粒酶B在哮喘大鼠肺組織中的表達及重組人生長激素的干預作用[J];中國當代兒科雜志;2011年03期

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  本文關(guān)鍵詞：鈣激活氯離子通道對哮喘氣道杯狀細胞凋亡與黏液高分泌的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：445917