目的 1.觀察在不同濃度及時(shí)間的香煙煙霧作用下,人氣道平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡的變化趨勢; 2.探討香煙煙霧促進(jìn)人氣道平滑肌細(xì)胞增殖/凋亡失衡是否通過線粒體凋亡途徑或死亡受體途徑進(jìn)行,及是否受Bcl-2家族和TNFR超家族的調(diào)控; 3.探討在香煙煙霧作用下,人氣道平滑肌細(xì)胞中ROS的變化是否調(diào)控細(xì)胞周期調(diào)控因子NF-κB的表達(dá),進(jìn)而影響平滑肌細(xì)胞的增殖和凋亡。 材料與方法 本實(shí)驗(yàn)采用組織塊貼壁法原代培養(yǎng)人氣道平滑肌細(xì)胞(HASMCs),用胰蛋白酶消化法傳代細(xì)胞,并將HASMCs隨機(jī)分成4個(gè)時(shí)間干預(yù)組:2.5%CSE、5%CSE、10%CSE和20%CSE組,3個(gè)時(shí)間干預(yù)組:24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)組及對照組。用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測不同組細(xì)胞的增殖程度和活性情況。AO/EB熒光染色和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化和細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)變化。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Realtime- PCR)檢測不同濃度和時(shí)間CSE作用下Bcl-2、Bax、Bad、Fas、FasL和NF-κB在mRN...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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圖1肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞呈梭形，相互融合，

圖1肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞呈梭形，相互融合，圖2免疫組化表明PASMC中α-actin呈現(xiàn)“峰和谷”生長(相差顯微鏡×100)表達(dá)陽性（SP×400）Fig.1HASMCsappearedspindle-shaped,Fig.2Positiveexp....

圖2免疫組化表明PASMC中α-actin呈現(xiàn)“峰和谷”生長(相差顯微鏡×100)表達(dá)陽性（SP×400）

圖1肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞呈梭形，相互融合，圖2免疫組化表明PASMC中α-actin呈現(xiàn)“峰和谷”生長(相差顯微鏡×100)表達(dá)陽性（SP×400）Fig.1HASMCsappearedspindle-shaped,Fig.2Positiveexp....

圖3HASMC中PCNA蛋白的表達(dá)（SP×200）

DE圖3HASMC中PCNA蛋白的表達(dá)（SP×200）A.對照組；B.2.5%CSE組；C.5%CSE組；D.10%CSE組；E.20%CSE組Fig.3ExpressionofPCNAproteininHASMC.(SP×200)A.control;B.....

圖4不同濃度香煙煙霧作用24小時(shí)凋亡和壞死氣道平滑肌細(xì)胞AO/EB染色（SP×200）

29圖4不同濃度香煙煙霧作用24小時(shí)凋亡和壞死氣道平滑肌細(xì)胞AO/EB染色（SP×200）A．對照組；B．2.5%CSE組;C．5%CSE組;D．10%CSE組;E．20%CSE組Figure4Demonstrationofapoptosisa....

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