研究目的肺纖維化是一種由多種因素導致的進行性發(fā)展的肺部疾患,其發(fā)病機制至今尚未完全闡明。肺泡II型上皮細胞的衰老與肺纖維化的發(fā)病密切相關(guān)。運動鍛煉已經(jīng)被廣泛認為在疾病預防和康復上是一種安全有效的手段。作為一種重要的氣體信號分子,H₂S在許多疾病的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要的調(diào)控作用,如可以通過逆轉(zhuǎn)人臍靜脈內(nèi)皮細胞及神經(jīng)元的衰老改善相關(guān)疾病。因此,本論文的研究目的是首先探明運動鍛煉改善肺纖維化是否與H₂S有關(guān),其機制是什么?接著探討H₂S能否逆轉(zhuǎn)肺泡上皮細胞的衰老從而改善肺纖維化。研究方法第一部分:建立BLM誘導的肺纖維化小鼠模型,分別對小鼠進行運動干預和外源性補充H₂S處理,Masson染色法觀察小鼠肺組織中膠原沉積的情況并統(tǒng)計肺組織中纖維化的面積;ELISA檢測肺組織中羥脯氨酸、I型膠原和TGF-β1含量;免疫熒光共染觀察上皮細胞標志物E-cadherin和間質(zhì)細胞標記物α-SMA的表達;Western Blot檢測LRP-6/β-catenin信號通路相關(guān)蛋白表達;鋅捕獲法檢測小鼠肺組織中內(nèi)源性H<...

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
中英文名詞縮略表
文獻綜述:硫化氫抗氧化應(yīng)激的相關(guān)機制
第一部分 硫化氫在運動改善小鼠肺纖維化中的作用
    1.前言
    2.材料與方法
        2.1 主要設(shè)備與試劑
        2.2 實驗流程圖
        2.3 實驗動物
            2.3.1 實驗分組
            2.3.2 運動方案及藥物用量
            2.3.3 小鼠肺纖維化模型制備
    3.動物取材與檢測指標
        3.1 羥脯氨酸(hydroxyproline)的檢測
        3.2 Ⅰ型膠原(collagen Ⅰ)和TGF-β的檢測
        3.3 內(nèi)源性H₂S含量的檢測
        3.4 Masson染色
        3.5 免疫熒光標記E-cadherin和 a-SMA
        3.6 蛋白質(zhì)印記分析(Western Blot Analysis)
    4.統(tǒng)計學分析
    5.研究結(jié)果
        5.1 運動改善博萊霉素誘導小鼠肺纖維化
        5.2 運動逆轉(zhuǎn)博萊霉素誘導的肺組織EMT
        5.3 運動抑制博來霉素誘導的肺組織LRP6/β-catenin信號通路
        5.4 運動逆轉(zhuǎn)博來霉素誘導的小鼠肺組織中內(nèi)源性H₂S含量
        5.5 H₂S抑制博來霉素誘導的肺纖維化
        5.6 H₂S逆轉(zhuǎn)博來霉素誘導的肺組織EMT
        5.7 H₂S抑制博來霉素誘導的肺組織LRP6/β-catenin信號通路
    6.分析與討論
    7.結(jié)論
第二部分 H₂S在肺泡上皮細胞衰老中的作用及機制
    1.前言
    2.研究方法
        2.1 細胞的培養(yǎng)與處理
        2.2 實時熒光定量PCR法(Real-time PCR)
        2.3 蛋白質(zhì)印跡分析法(Western Blot)
        2.4 SA-β-Gal半乳糖苷酶活性檢測
        2.5 CCK8法檢測細胞增殖
    3.統(tǒng)計學分析
    4.研究結(jié)果
        4.1 氣管內(nèi)滴注BLM后不同時間肺纖維化的進行性發(fā)展
        4.2 BLM誘導肺組織中P53/P21的表達
        4.3 BLM對 H₂S合成酶CBS和CSE及內(nèi)源性H₂S含量的影響
        4.4 氣管內(nèi)滴注BLM后,小鼠肺組織中纖維化的面積、P53及P21蛋白表達量與內(nèi)源性H₂S含量的關(guān)系
        4.5 離體情況下,Na HS(H₂S供體)對BLM誘導P53/P21表達的影響
        4.6 離體情況下,NaHS(H₂S供體)逆轉(zhuǎn)博來霉素誘導的ATⅡ細胞SA-β-Gal半乳糖苷酶活性
        4.7 離體情況下,NaHS(H₂S供體)逆轉(zhuǎn)博來霉素誘導的ATⅡ衰老細胞分泌的SASP
        4.8 離體情況下,NaHS(H₂S供體)抑制成纖維細胞的異常增殖
        4.9 在體情況下,腹腔注射NaHS(H₂S供體)對BLM誘導的肺組織中P53/P21表達的影響
        4.10 在體情況下,腹腔注射NaHS(H₂S供體)抑制博來霉素誘導的小鼠肺組織中SASP水平
        4.11 MG132逆轉(zhuǎn)H₂S對BLM誘導的L2細胞中高表達的P53的抑制作用
    5.分析與討論
    6.結(jié)論
全文總結(jié)
主要參考文獻
攻讀碩士學位期間學術(shù)科研成果
致謝



本文編號：3950791