本文關(guān)鍵詞：hIL-37基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)哮喘治療作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:全球有幾億人正遭受著哮喘的折磨,就本質(zhì)而言哮喘是由多種炎癥因子參與的呼吸道炎癥。IL-37是IL-1家族的一員,在既往的研究中人們已經(jīng)證實(shí)IL-37是一種很強(qiáng)的抑炎因子。Chris用IL-37轉(zhuǎn)基因小鼠建立腸炎模型時(shí)發(fā)現(xiàn)IL-37轉(zhuǎn)基因小鼠腸道病情更輕,David用IL-37干預(yù)肝炎時(shí)也發(fā)現(xiàn)IL-37可以有效的緩解病情,他們的研究結(jié)果充分的證明了IL-37對(duì)炎癥性疾病有很好的治療效果。IL-37因子比較昂貴且半衰期短,這讓它很難直接應(yīng)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究,在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究時(shí)必須找到一個(gè)理想的基因表達(dá)載體來分泌IL-37,MSC就是這樣一種理想的基因表達(dá)載體。MSC作為基因表達(dá)載體可以高效的表達(dá)目的基因且具有向炎癥部位定向歸巢的作用。我們是否可以用IL-37基因修飾的MSC用于哮喘的治療了?這個(gè)科學(xué)問題的提出和解決將為臨床上哮喘的治療提供一種新的方案。目的:研究IL-37對(duì)哮喘氣道炎癥的抑制作用,并探索其相關(guān)的機(jī)制。方法:體外分離培養(yǎng)與提純小鼠MSC。Ad-IL-37轉(zhuǎn)染MSC后用ELISA和Western檢測(cè)轉(zhuǎn)染Ad-IL-37后的MSC分泌IL-37的情況。建立小鼠哮喘治療模型,通過檢測(cè)血中的lgE lgG1濃度,肺泡灌洗液中IL-4 IL-5 IL-13濃度及細(xì)胞總數(shù)評(píng)價(jià)小鼠氣道炎癥程度。體外驗(yàn)證IL-37對(duì)DC的影響:實(shí)驗(yàn)組用LPS+IL-37處理DC 24小時(shí)候,對(duì)照組用LPS處理DC 24小時(shí),24小時(shí)后用ELISA檢測(cè)DC分泌細(xì)胞因子的情況。體外驗(yàn)證IL-37對(duì)OT1 OT2 T細(xì)胞增殖的影響,磁珠分選DC然后用相應(yīng)的肽段OVA處理2小時(shí),時(shí)間到后加入CFSE標(biāo)記的OT1或OT2 T細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)組加入IL-37三天后收集細(xì)胞進(jìn)行流式分析。體外驗(yàn)證IL-37對(duì)惰性T細(xì)胞分化成Treg的影響,用Anti-CD3抗體刺激惰性T細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)組加入IL-37+IL-2+TGF-beta對(duì)照組加入IL-2+TGF-beta五天后用流式分析結(jié)果。體外驗(yàn)證IL-37對(duì)Treg增殖的影響,分選出Treg染上CFSE加入一定數(shù)量的DC,實(shí)驗(yàn)組加入IL-37+IL-2,對(duì)照組加入IL-2,五天后流式分析。結(jié)果:通過CD45、CD11b雙陰選得到純度為90%MSC符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。Ad-IL-37腺病毒成功轉(zhuǎn)染MSC。ELISA及Western結(jié)果顯示Ad-IL37轉(zhuǎn)染后的MSC可以高效的表達(dá)IL-37。IL-37小鼠哮喘治療模型中ELISA結(jié)果顯示IL-37治療組小鼠肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13促炎因子濃度下降,血清中OVA-lgG1、lgE含量降低。體外實(shí)驗(yàn)證明IL-37抑制DC的活化,抑制OT1 OT2T細(xì)胞的增殖,促進(jìn)惰性T細(xì)胞向Treg的分化,促進(jìn)Treg的增殖。結(jié)論:Ad-IL37轉(zhuǎn)染MSC后,MSC可以高效穩(wěn)定的表達(dá)IL-37。IL-37可以有效的抑制DC的活化,抑制CD4 T CD8 T細(xì)胞的增殖同時(shí)促進(jìn)Treg生成。小鼠OVA哮喘治療模型證明IL-37可以減輕哮喘的病情。
【關(guān)鍵詞】：IL-37 MSC Treg 哮喘 免疫抑制 DC
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R562.25
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-11
• 第1章 引言11-12
• 第2章 材料與方法12-24
• 2.1 材料12-16
• 2.1.1 主要儀器12-13
• 2.1.2 主要試劑購(gòu)買13-14
• 2.1.3 主要試劑的配制14-16
• 2.2 方法16-23
• 2.2.1 分離小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與培養(yǎng)16
• 2.2.2 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞提純與鑒定16-17
• 2.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染17
• 2.2.4 檢測(cè)轉(zhuǎn)染目的基因后MSC表達(dá)IL-37蛋白的情況17-19
• 2.2.5 建立小鼠哮喘治療模型：19-20
• 2.2.6 流式分析模型小鼠肺泡灌洗液和脾臟中的各種免疫細(xì)胞比率及數(shù)量20
• 2.2.7 IL-37抑制DC活化及細(xì)胞因子的分泌20-21
• 2.2.8 IL-37抑制OT1 OT2細(xì)胞的增殖21-22
• 2.2.9 IL-37促進(jìn)惰性T細(xì)胞向Treg分化22
• 2.2.10 IL-37促進(jìn)treg細(xì)胞的增殖22-23
• 2.3 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23-24
• 第3章 結(jié)果24-32
• 3.1 體外分離培養(yǎng)與提純小鼠MSC及簽定:24-25
• 3.2 IL-37在宿主細(xì)胞MSC中穩(wěn)定且高效的表達(dá)25-26
• 3.3 在小鼠哮喘治療模型中IL-37可以有效的減輕哮喘的病情26-28
• 3.4 小鼠哮喘模型中IL-37促使脾臟Treg升高抑制CD4~+T細(xì)胞活化28-29
• 3.5 IL-37抑制DC的活化29-30
• 3.6 IL-37抑制OT1 OT2細(xì)胞的增殖30
• 3.7 IL-37促進(jìn)惰性T細(xì)胞向Treg分化，且促進(jìn)Treg的增殖30-32
• 第4章 討論32-34
• 第5章 結(jié)論與展望34-35
• 5.1 結(jié)論34
• 5.2 不足之處和展望34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果39-40
• 綜述40-46
• 參考文獻(xiàn)44-46

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