背景及目的慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)小鼠肺泡巨噬細胞(AM)吞噬功能低下與AM細胞骨架的異常重排關(guān)系密切;肌動蛋白相關(guān)蛋白(Arp)2/3復(fù)合體可正性調(diào)節(jié)F-肌動蛋白導(dǎo)致細胞骨架重排,但慢阻肺AM吞噬功能低下與Arp2/3復(fù)合體調(diào)控F-肌動蛋白影響細胞骨架排列的研究較少,故本研究探討在慢阻肺小鼠AM中,Arp2/3復(fù)合體在吞噬功能中的作用。方法采用單純香煙煙霧暴露法建立慢阻肺模型,20只8周齡的SPF級BALB/c雄性小鼠進行模型建立,20只同樣條件的小鼠為健康對照組,模型建成后采用EMMS動物肺功能儀測定其肺功能;處死小鼠,觀察肺組織形態(tài)變化;分離AM,并將其分為健康對照組、慢阻肺組、健康CK666組、慢阻肺CK666組。噻唑蘭比色法(MTT)測定CK666作用的最適濃度和時間,向健康CK666組和慢阻肺CK666組AM中加入10μmol/L CK666培養(yǎng)24 h;流式細胞術(shù)測AM吞噬異硫氰酸熒光素標記的大腸桿菌(FITC-E.coli)的能力;蛋白印跡法測定AM Arp2及F-肌動蛋白的表達;激光共聚焦顯微鏡測AM Arp2、F-肌動蛋白、吞噬的FITC-E.coli平均光密度及...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1香煙煙霧暴露建立慢阻肺模型（A：早期B：晚期）

蘭州大學碩士學位論文肌動蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合體在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬細胞吞噬功能低下中的作用2實驗方法2.1慢阻肺造模2.1.1單純香煙煙霧暴露法建立慢阻肺小鼠模型沿用本團隊建模方法建立慢阻肺小鼠模型[64]。將4只蘭州牌香煙置于50cm30cm35....

圖2蛋白濃度標準曲線

的細胞進行離心，洗滌一次；00μl的細胞裂解液，冰上裂解約30min；用移液器將細胞懸液轉(zhuǎn)移至無菌EP管中，低度；煮沸變性后，在-20℃下儲存。蛋白濃度工作液：根據(jù)試劑盒說明配制，置于室溫備用白樣品；樣品加20μl到96孔板中；作液，培養(yǎng)30min后....

圖3灌膠板2.6.4電泳

肌動蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合體在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬細胞夾子將厚薄玻璃板固定在灌膠板上，用加樣槍向兩觀察10min，如果沒有泄漏，沿一側(cè)緩慢倒出蒸餾水余水分；加入10%分離膠,再用三蒸水液封，待分離膠凝固后齒梳，待其凝固，密封保存。

圖4電泳2.6.5轉(zhuǎn)膜

圖3灌膠板膠上的梳子，將其放入電泳槽中，拔掉梳子，上樣，換用恒壓（120V）電泳1h。

本文編號：3898186