目的:探討髓樣相關(guān)蛋白8/14(MRP8/14)對(duì)人肺泡上皮A549細(xì)胞存活及凋亡的影響,并研究核因子κB(NF-κB)在其中的作用。方法:MRP8/14以不同劑量或刺激時(shí)間處理A549細(xì)胞,CCK-8法檢測其對(duì)細(xì)胞活力的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率;Western blot法及間接免疫熒光法檢測A549細(xì)胞內(nèi)NF-κB p65蛋白核移位情況;Western blot法檢測NF-κB p65蛋白磷酸化水平;使用NF-κB特異性抑制劑Bay 11-7082探討NF-κB在凋亡過程中的作用。結(jié)果:MRP8/14能以劑量和時(shí)間依賴的方式影響A549細(xì)胞的存活(P<0.05),流式細(xì)胞技術(shù)檢測結(jié)果表明MRP8/14處理后A549細(xì)胞凋亡率明顯增加(P<0.01)。此外,MRP8/14能夠誘導(dǎo)NF-κB p65蛋白發(fā)生顯著磷酸化,并移位至細(xì)胞核中,NF-κB信號(hào)通路明顯激活,而NF-κB特異性抑制劑Bay 11-7082能夠明顯抑制MRP8/14誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡(P<0.01)。結(jié)論:NF-κB在MRP8/14所導(dǎo)致的肺泡上皮細(xì)胞凋亡過程發(fā)揮了重要作用。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    1 細(xì)胞培養(yǎng)
    2 主要試劑
    3 主要方法
        3.1 MRP8/14蛋白制備
        3.2 CCK8法檢測細(xì)胞活性
        3.3 Annexin-V/PI流式細(xì)胞技術(shù)檢測A549細(xì)胞凋亡
        3.4 細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白水平檢測
        3.5 間接免疫熒光檢測NF-κB p65入核
        3.6 Western blot法檢測NF-κB p65磷酸化水平
    4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1 MRP8及MRP14蛋白純化鑒定
    2 MRP8/14對(duì)A549細(xì)胞活力的影響
    3 MRP8/14對(duì)A549細(xì)胞凋亡的影響
    4 MRP8/14對(duì)A549細(xì)胞NF-κB p65入核的影響
    5 MRP8/14對(duì)A549細(xì)胞NF-κB p65磷酸化水平的影響
    6 NF-κB抑制劑對(duì)MRP8/14所致A549細(xì)胞凋亡的影響
討論



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