目的構(gòu)建針對(duì)mTORC2特異組成蛋白中rictor基因的重組慢病毒沉默載體,研究其對(duì)mTORC2/SGK1信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)制及其對(duì)肺泡上皮細(xì)胞鈉離子通道的影響,并探討其在急性呼吸窘迫綜合征及急性肺損傷中的作用。方法構(gòu)建目的基因的rictor干擾質(zhì)粒及空載質(zhì)粒并與慢病毒包裝體系共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,收集病毒上清液,經(jīng)離心、濃縮及純化獲取重組慢病毒。測(cè)定病毒滴度,感染A549細(xì)胞并篩選細(xì)胞穩(wěn)定株,RT-PCR驗(yàn)證目的基因rictor沉默情況。采用PCR和western blot檢測(cè)該通路中各信號(hào)指標(biāo)表達(dá)情況。結(jié)果成功構(gòu)建沉默rictor基因的重組慢病毒并感染A549細(xì)胞和獲得細(xì)胞穩(wěn)定株。與空白組及對(duì)照組相比,shRNA-rictor組中rictor和下游SGK1、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC mRNA水平均有明顯下降(P<0.05)。同時(shí),shRNA-rictor組中rictor和下游SGK1、P-SGK、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC的蛋白水平較前兩組均有明顯下降(P<0.05)。結(jié)論沉默rictor基因?qū)TORC2/SGK1信號(hào)通路有明顯的調(diào)控作用,同...

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【文章目錄】：
1材料與方法
2結(jié)果
3討論



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