肺纖維化(pulmonary fibrosis,PF)是一種慢性、進(jìn)展性并且通常致死的纖維化肺疾病,其特征主要表現(xiàn)為(肌)成纖維細(xì)胞灶的形成以及細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的過(guò)度沉積,特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是PF最為常見(jiàn)的表現(xiàn)形式。PF目前尚缺乏行之有效的治療手段,闡明其潛在的發(fā)病機(jī)制以探尋有效治的療靶點(diǎn)已迫在眉睫。Wnt/β-catenin傳導(dǎo)通路在PF發(fā)展中發(fā)揮十分重要的作用,活化后的Wnt/β-catenin通路可以誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞的增殖和(肌)成纖維細(xì)胞的活化,從而引起過(guò)度ECM的分泌并沉積。并且,Wnt/β-catenin通路的特異性拮抗劑能夠阻斷活化的Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)并遏制PF的發(fā)展。MicroRNAs(miRNAs)是一類(lèi)由20-25個(gè)核苷酸構(gòu)成的單鏈非編碼RNA,miRNAs能夠不完全互補(bǔ)于mRNA 3’端的非編碼區(qū)從而抑制進(jìn)靶mRNA的翻譯或促進(jìn)靶mRNA的裂解,多種miRNA表達(dá)的失調(diào)與PF的發(fā)展有著密切關(guān)聯(lián)。Wnt/β-catenin通路在正常器官的發(fā)...

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)小鼠的來(lái)源及飼養(yǎng)
    2.3 主要試劑及其配制
        2.3.1 主要試劑
        2.3.2 抗體配制
        2.3.3 小鼠PF模型建立所用試劑配制
        2.3.4 慢病毒構(gòu)建信息及慢病毒懸液配制
        2.3.5 Western Blot相關(guān)試劑配制
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法及檢測(cè)指標(biāo)
        2.4.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⒓胺谓M織樣本收集
        2.4.2 肺組織總蛋白的提取及定量
        2.4.3 Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)
        2.4.4 肺組織總RNA的提取及濃度純度測(cè)定
        2.4.5 qRT-PCR檢測(cè)肺內(nèi)miR-154表達(dá)
        2.4.6 H&E及Masson染色
        2.4.7 冰凍切片
    2.5 統(tǒng)計(jì)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 miR-154在BLM誘導(dǎo)的PF模型的肺內(nèi)表達(dá)升高
        3.1.1 肺纖維化模型成功建立
        3.1.2 qRT-PCR檢測(cè)小鼠肺內(nèi)miR-154表達(dá)
    3.2 上調(diào)的Wnt/β-catenin通路在小鼠PF模型發(fā)展中起重要作用
        3.2.1 干預(yù)模型
        3.2.2 Wester blot檢測(cè)蛋白表達(dá)
        3.2.3 病理學(xué)改變和病理評(píng)分
    3.3 miR-154能夠上調(diào)Wnt/β-catenin通路并在小鼠PF模型中起促纖維化作用
        3.3.1 干預(yù)模型
        3.3.2 病毒轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
        3.3.3 qRT-PCR檢測(cè)肺組織內(nèi)miR-154表達(dá)
        3.3.4 病理學(xué)改變和病理評(píng)分
        3.3.5 Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)
    3.4 miR-154的促纖維化作用是通過(guò)上調(diào)Wnt/β-catenin信號(hào)通路介導(dǎo)的
        3.4.1 干預(yù)模型
        3.4.2 Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)
        3.4.3 病理學(xué)改變和病理評(píng)分
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3847226