本文關(guān)鍵詞：大鼠矽肺差異蛋白的篩選及S100A8在矽肺纖維化中作用的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的本研究通過(guò)制備不同時(shí)期的矽肺大鼠模型,利用蛋白質(zhì)組學(xué)中的雙向凝膠電泳和質(zhì)譜分析技術(shù),探討在不同時(shí)期矽肺大鼠肺組織中均呈明顯差異表達(dá)的蛋白種類(lèi),并挑選其中評(píng)分最高的一種蛋白(S100A8)在矽肺動(dòng)物模型和細(xì)胞水平加以驗(yàn)證,了解S100A8與矽肺的相關(guān)性,為矽肺的發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1大鼠矽肺模型的復(fù)制:SPF級(jí)雄性Wistar大鼠90只適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,隨機(jī)分為2組,模型組(即染矽塵組)60只、空白對(duì)照組30只。模型組利用非暴露氣管法一次性灌注Si O2懸液復(fù)制矽肺模型,空白對(duì)照組以滅菌生理鹽水替代。建模時(shí)間記為0周,于染塵后1周、2周、3周、4周、6周和8周6個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死模型組10只和空白對(duì)照組5只大鼠,同時(shí)肉眼觀察大鼠肺臟病理變化,迅速取出肺組織,大部分保存在液氮中備用,并將余下肺組織甲醛固定以鑒定造模是否成功及免疫組化檢查;2矽肺差異蛋白的篩選:利用雙向電泳技術(shù)篩選矽肺的差異蛋白點(diǎn),對(duì)所篩選的部分差異蛋白進(jìn)行質(zhì)譜分析;挑選其中評(píng)分最高的差異蛋白S100A8進(jìn)行驗(yàn)證;3矽肺差異蛋白的驗(yàn)證:①制作大鼠模型組和空白對(duì)照組肺組織的石蠟切片,免疫組織化學(xué)檢測(cè)S100A;②提取大鼠模型組和空白對(duì)照組的肺組織總蛋白及RNA;③再選SPF級(jí)雄性Wistar大鼠建立矽肺模型,支氣管肺泡灌洗獲取肺泡巨噬細(xì)胞,用Si O2進(jìn)行刺激,18小時(shí)后收集上清液并保存;④體外肺纖維化模型的復(fù)制:胰酶消化法獲取肺成纖維細(xì)胞,培養(yǎng)至第4代,用收集的Si O2刺激的巨噬細(xì)胞上清進(jìn)行刺激;⑤制作細(xì)胞爬片,免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)S100A8;⑥提取體外纖維化模型和空白空白對(duì)照組細(xì)胞的總蛋白及RNA;⑦Western-blot法和實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)S100A8在大鼠矽肺模型和細(xì)胞水平不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)情況,應(yīng)用自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行圖像分析;4應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件,對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用單因素方差分析比較多組間均數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1成功復(fù)制了大鼠矽肺模型;2雙向電泳技術(shù)篩選出45個(gè)矽肺差異蛋白點(diǎn),選取其中7個(gè)點(diǎn)質(zhì)譜分析結(jié)果得到6個(gè)差異蛋白;3免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)檢查:空白對(duì)照組S100A8呈微弱表達(dá),模型組S100A8表達(dá)高于空白對(duì)照組,隨時(shí)間點(diǎn)增加而逐漸增強(qiáng);4 Western-blot法檢測(cè)結(jié)果顯示S100A8在空白對(duì)照組呈弱表達(dá),在大鼠矽肺模型和細(xì)胞水平中的表達(dá)均高于空白對(duì)照組且呈逐漸升高,且組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);5實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)結(jié)果顯示S100A8在空白對(duì)照組呈弱表達(dá),在大鼠矽肺模型和細(xì)胞水平中的表達(dá)均高于空白對(duì)照組且呈增高趨勢(shì),組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1過(guò)氧化物還原酶、α-烯醇化酶、巨噬細(xì)胞加帽蛋白、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、鈣結(jié)合蛋白A8及肌動(dòng)蛋白在矽肺發(fā)展過(guò)程的不同時(shí)期均呈差異性表達(dá);2經(jīng)矽肺動(dòng)物模型和細(xì)胞水平的驗(yàn)證,鈣結(jié)合蛋白S100A8在矽肺纖維化的發(fā)展中呈高表達(dá),可能在矽肺的發(fā)展中發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：矽肺 差異蛋白 鈣結(jié)合蛋白S100A8
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R135.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-13
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究13-41
• 1.1 材料與方法13-25
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及模型試劑13
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備13-14
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)主要試劑14-15
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)部分試劑的配制15-16
• 1.1.5 實(shí)驗(yàn)分組及矽肺模型的復(fù)制16-17
• 1.1.6 大鼠矽肺組織差異蛋白的篩選17
• 1.1.7 差異蛋白S100A8的驗(yàn)證17-25
• 1.1.8 統(tǒng)計(jì)方法25
• 1.2 結(jié)果25-35
• 1.2.1 大鼠矽肺組織差異蛋白的篩選25-29
• 1.2.2 差異蛋白S100A8的驗(yàn)證29-35
• 1.3 討論35-38
• 1.4 小結(jié)38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 第2章 綜述鈣結(jié)合蛋白S100A8在矽肺纖維化中的研究41-53
• 2.1 S100蛋白的概述41-42
• 2.2 S100A8結(jié)構(gòu)特點(diǎn)42-43
• 2.3 S100A8在肺部疾病中的研究43-46
• 2.3.1 炎癥43-44
• 2.3.2 癌癥44-45
• 2.3.3 矽肺45-46
• 2.4 S100A8在其他器官疾病的研究46-47
• 2.5 小結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 結(jié)論53-54
• 致謝54-55
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介55-56
• 作者簡(jiǎn)介56-57
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 馮旺琴;崔竹梅;劉芝華;李玉軍;;S100A8和S100A9在子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2008年11期

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3 趙學(xué)峰;王世鑫;曾家偉;何冰;涂植光;;應(yīng)用SELDI-TOF-MS篩選矽肺模型大鼠的血清生物標(biāo)志物及建立血清蛋白指紋分類(lèi)決策樹(shù)[J];武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年03期

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5 朱理安;方寧遠(yuǎn);;α烯醇化酶——古老的蛋白,嶄新的功能[J];國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志;2007年04期

6 張維;高云升;;S100A8在胃癌中的表達(dá)及臨床意義[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2012年03期

7 王穎;陳苗苗;朱雪瓊;;S100A8和S100A9在婦科惡性腫瘤中的表達(dá)和臨床意義[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2013年09期

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本文編號(hào)：377488