背景和目的:革蘭氏陰性桿菌細(xì)胞壁的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是內(nèi)毒素的主要成份,也是形成膿毒癥相關(guān)性肺纖維化的重要致病因素。肺成纖維細(xì)胞的異常聚集和活化是肺纖維化形成的重要過程,但其具體機制未明。本研究采用LPS刺激肺成纖維細(xì)胞作為體外研究膿毒癥相關(guān)性肺纖維化模型,深入探究LPS與肺成纖維細(xì)胞增殖的相互關(guān)系并明確叉頭框蛋白O3a(Forkhead Box O3a,FoxO3a)和細(xì)胞周期調(diào)控負(fù)因子p27(FoxO3a/p27信號通路)在該過程中的作用,由此進一步豐富和完善LPS致肺纖維化的發(fā)病機理,為探索膿毒癥相關(guān)性肺纖維化的防治手段奠定基礎(chǔ)。方法:體外原代培養(yǎng)小鼠肺成纖維細(xì)胞,通過CCK8細(xì)胞增殖實驗檢測LPS刺激肺成纖維細(xì)胞后細(xì)胞的增殖情況;以Western Blot技術(shù)和免疫熒光技術(shù)檢測LPS作用于小鼠肺成纖維細(xì)胞后細(xì)胞周期調(diào)控負(fù)因子p27蛋白的表達(dá)情況;通過胞漿胞核分離技術(shù)分別檢測胞核FoxO3a和胞漿磷酸化的FoxO3a(p-FoxO3a)的表達(dá)情況;通過慢病毒轉(zhuǎn)染使細(xì)胞過表達(dá)FoxO3a或者通過吉非替尼活化FoxO3a后,以Western Blo...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1.前言
2.材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要實驗儀器和耗材
        2.1.3 試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠肺成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)
        2.2.2 CCK8 細(xì)胞增殖實驗
        2.2.3 蛋白質(zhì)的提取和Western Blot技術(shù)
        2.2.4 免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence,IF)檢測p27 蛋白的表達(dá)
        2.2.5 FoxO3a慢病毒過表達(dá)載體及其穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建
        2.2.6 統(tǒng)計學(xué)處理
3.實驗結(jié)果
    3.1 原代肺成纖維細(xì)胞的鑒定
    3.2 LPS刺激可引起肺成纖維細(xì)胞增殖
    3.3 LPS刺激可引起肺成纖維細(xì)胞p27 蛋白表達(dá)下調(diào),且具有劑量依賴性
    3.4 LPS引起FoxO3a失活同時促進肺成纖維細(xì)胞增殖
    3.5 過表達(dá)FoxO3a的肺成纖維細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株的鑒定
    3.6 FoxO3a蛋白的過表達(dá)可抑轉(zhuǎn)LPS刺激引起的p27 蛋白下調(diào)
    3.7 FoxO3a蛋白的過表達(dá)可抑轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞增殖
    3.8 吉非替尼可抑轉(zhuǎn)LPS介導(dǎo)的FoxO3a失活
    3.9 吉非替尼可抑轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的p27 蛋白下調(diào)
    3.10 吉非替尼可抑轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞增殖過程
4.討論
5.結(jié)論
參考文獻
論文發(fā)表情況
致謝



本文編號：3769795