第一部分間充質(zhì)干細胞來源的細胞外囊泡分離鑒定和巨噬細胞攝取情況研究目的:脂肪來源間充質(zhì)干細胞（Adipose mesenchymal stem cells,ASC）可向細胞外分泌豐富的細胞外囊泡,ASCs可減輕LPS誘導的肺損傷,其部分的作用可能通過EVs實現(xiàn)的。作為肺組織內(nèi)的免疫細胞巨噬細胞如何受其影響,是否攝取EVs未見報道。本部分研究主要通過超速離心獲取EVs并進一步鑒定,在體和離體實驗證明巨噬細胞攝取一定量的EVs。為下一步證明EVs在LPS誘導的急性肺損傷發(fā)生發(fā)展中的作用。研究方法:收集培養(yǎng)的MSCs細胞上清采用差速超離的方法獲得EVs,并用國際上標準的方法鑒定。將人單核細胞系THP-1細胞和CD63標志帶熒光的EVs共培養(yǎng),24h后熒光電鏡觀察;將用粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）刺激細胞骨髓來源的巨噬細胞誘導成熟（BMDM）,與經(jīng)CD63標志帶熒光的EVs共培養(yǎng),6h后流式細胞儀觀察巨噬細胞攝取的情況;采用LPS誘導氣管內(nèi)滴入WT（C57BL/6）小鼠致肺損傷模型,造模后將用DID標志過的EVs氣管內(nèi)滴入,24 h后觀察流式細胞儀檢測肺泡灌洗液中巨噬細胞里DI... 

【文章頁數(shù)】：154 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
前言
中文摘要
英文摘要
中英文縮寫詞對照表
引言
    參考文獻
第一部分 間充質(zhì)干細胞來源的細胞外囊泡分離鑒定和巨噬細胞攝取情況
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
        1.3 統(tǒng)計學分析
    2 結(jié)果
        2.1 MSCs來源的EVs鑒定
        2.2 體內(nèi)和體外實驗巨噬細胞攝入EVs
    3 討論
    4 小結(jié)
    5 參考文獻
第二部分 間充質(zhì)干細胞來源的細胞外囊泡減輕急性肺損傷的研究
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
        1.3 統(tǒng)計學方法
    2 結(jié)果
        2.1 MSC-EVs(間充質(zhì)干細胞來源的細胞外囊泡)對培養(yǎng)骨髓巨噬細胞(BMDMs)的作用
        2.2 體內(nèi)動物實驗:LPS 引起的急性肺損傷模型實驗
    3 討論
    4 小結(jié)
    5 參考文獻
第三部分 間充質(zhì)干細胞通過細胞外囊泡傳遞miR-27a-3p至巨噬細胞減輕急性肺損傷
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
        1.3 統(tǒng)計學方法
    2 結(jié)果
        2.1 體外miR-27a-3p轉(zhuǎn)移至單核細胞或巨噬細胞
        2.2 體外慢病毒轉(zhuǎn)染BMDMs實驗
        2.3 小鼠氣管內(nèi)轉(zhuǎn)染LV-anti-miR-27a-3p增加急性肺損傷
        2.4 LV-anti-miR-27a-3p轉(zhuǎn)染MSCs,分離的EVs與LV-control轉(zhuǎn)染MSCs,分離的EVs對急性肺損傷的影響
        2.5 雙熒光素酶實驗證明小鼠中miR-27a-3p的靶點之一是NFKB1
    3 討論
    4 小結(jié)
    5 參考文獻
全文結(jié)論
綜述 間充質(zhì)干細胞及其細胞外囊泡的功能和臨床應用挑戰(zhàn)
    參考文獻
作者簡歷及在學期間所取得的科研成果



本文編號：3682533