第一部分間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞外囊泡分離鑒定和巨噬細(xì)胞攝取情況研究目的:脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞（Adipose mesenchymal stem cells,ASC）可向細(xì)胞外分泌豐富的細(xì)胞外囊泡,ASCs可減輕LPS誘導(dǎo)的肺損傷,其部分的作用可能通過(guò)EVs實(shí)現(xiàn)的。作為肺組織內(nèi)的免疫細(xì)胞巨噬細(xì)胞如何受其影響,是否攝取EVs未見(jiàn)報(bào)道。本部分研究主要通過(guò)超速離心獲取EVs并進(jìn)一步鑒定,在體和離體實(shí)驗(yàn)證明巨噬細(xì)胞攝取一定量的EVs。為下一步證明EVs在LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷發(fā)生發(fā)展中的作用。研究方法:收集培養(yǎng)的MSCs細(xì)胞上清采用差速超離的方法獲得EVs,并用國(guó)際上標(biāo)準(zhǔn)的方法鑒定。將人單核細(xì)胞系THP-1細(xì)胞和CD63標(biāo)志帶熒光的EVs共培養(yǎng),24h后熒光電鏡觀察;將用粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）刺激細(xì)胞骨髓來(lái)源的巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)成熟（BMDM）,與經(jīng)CD63標(biāo)志帶熒光的EVs共培養(yǎng),6h后流式細(xì)胞儀觀察巨噬細(xì)胞攝取的情況;采用LPS誘導(dǎo)氣管內(nèi)滴入WT（C57BL/6）小鼠致肺損傷模型,造模后將用DID標(biāo)志過(guò)的EVs氣管內(nèi)滴入,24 h后觀察流式細(xì)胞儀檢測(cè)肺泡灌洗液中巨噬細(xì)胞里DI... 

【文章頁(yè)數(shù)】：154 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
前言
中文摘要
英文摘要
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引言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞外囊泡分離鑒定和巨噬細(xì)胞攝取情況
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2 結(jié)果
        2.1 MSCs來(lái)源的EVs鑒定
        2.2 體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)巨噬細(xì)胞攝入EVs
    3 討論
    4 小結(jié)
    5 參考文獻(xiàn)
第二部分 間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞外囊泡減輕急性肺損傷的研究
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2 結(jié)果
        2.1 MSC-EVs(間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞外囊泡)對(duì)培養(yǎng)骨髓巨噬細(xì)胞(BMDMs)的作用
        2.2 體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):LPS 引起的急性肺損傷模型實(shí)驗(yàn)
    3 討論
    4 小結(jié)
    5 參考文獻(xiàn)
第三部分 間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞外囊泡傳遞miR-27a-3p至巨噬細(xì)胞減輕急性肺損傷
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2 結(jié)果
        2.1 體外miR-27a-3p轉(zhuǎn)移至單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞
        2.2 體外慢病毒轉(zhuǎn)染BMDMs實(shí)驗(yàn)
        2.3 小鼠氣管內(nèi)轉(zhuǎn)染LV-anti-miR-27a-3p增加急性肺損傷
        2.4 LV-anti-miR-27a-3p轉(zhuǎn)染MSCs,分離的EVs與LV-control轉(zhuǎn)染MSCs,分離的EVs對(duì)急性肺損傷的影響
        2.5 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)證明小鼠中miR-27a-3p的靶點(diǎn)之一是NFKB1
    3 討論
    4 小結(jié)
    5 參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
綜述 間充質(zhì)干細(xì)胞及其細(xì)胞外囊泡的功能和臨床應(yīng)用挑戰(zhàn)
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間所取得的科研成果



本文編號(hào)：3682533