目的:通過對哮喘模型小鼠鼻腔免疫標準化粉塵螨疫苗進行治療,探討標準化粉塵螨疫苗對粉塵螨變應原誘導的變態(tài)反應性氣道炎癥的免疫保護作用,探討標準化粉塵螨疫苗在支氣管哮喘抗原特異性免疫治療中的機制。方法:1、21只4～6周齡SPF級Balb/c小鼠分成正常對照組、哮喘模型組、標準化粉塵螨疫苗治療組。正常對照組不做處理。用粉塵螨變應原提取液誘發(fā)哮喘制作哮喘小鼠模型,哮喘小鼠模型制作成功后用標準化粉塵螨疫苗（400μg）在小鼠麻醉狀態(tài)下行鼻腔免疫,連續(xù)免疫8次,每次間隔1天,免疫結束1周以后,用50μg/50μl Der f變應原滴鼻激發(fā),每天1次,連續(xù)7次。2、各組小鼠氣管插管進行支氣管肺泡灌洗,觀察支氣管肺泡灌洗液（BALF）中細胞總數和細胞分類;各組小鼠取肺組織,通過HE染色（haematoxylin and eosin）觀察小鼠肺部炎癥變化。3、各組小鼠用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清中IgE、IgA和IgG2a抗體;檢測肺泡灌洗液中IL-10、IL-4和IFN-γ水平;同時檢測脾細胞在變應原特異刺激下分泌的IL-10、IL-4和IFN-γ水平。4、各組小鼠用MTT法檢測脾淋巴細... 

【文章來源】：南昌大學江西省211工程院校

【文章頁數】：37 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

肺組織HE染色（×200）

3.9 流式細胞儀檢測CD4+CD25+Foxp3調節(jié)性T細胞數量用流式細胞術檢測標準化粉塵螨疫苗鼻腔免疫治療對脾細胞中調節(jié)性 T 細胞數量的影響。結果顯示，各組脾細胞 CD4+CD25+FOXP3+調節(jié)性 T 細胞占 CD4+CD25+淋巴細胞的百分比，分別為正常組 37.31±5.488，模型組 16.273±4.354，疫苗治療組 32.09±4.503。模型組中調節(jié)性 T 細胞數量比正常對照組顯著減少，而與模型組相比，標準化粉塵螨疫苗組能明顯誘導調節(jié)性 T 細胞數量增加（P<0.01）（圖 3.7）。上述結果提示，標準化粉塵螨疫苗鼻腔免疫能抑制 Der f變應原誘導的氣道高反應和氣道炎癥，其機理與調節(jié)性 T 細胞的誘導有關。

清和肺泡灌洗液中的細胞因子IL-4受到了顯著抑制，提示Th2反應受到了。氣道高反應性、炎癥細胞浸潤和特異性IgE抗體水平下降與支氣管肺泡中IL-10水平增加有關。炎性細胞因子IL-4的下降與調節(jié)性T細胞和耐受粘膜耐受可能是鼻腔免疫治療的機制之一。在免疫耐受中起重要作用CD25+FoxP3調節(jié)性T細胞(regulatory T cells,Treg),在標準化粉塵螨疫免疫治療后CD4+CD25+FoxP3細胞數量升高。提示標準化粉塵螨疫苗鼻腔機制與誘導調節(jié)性T細胞和免疫無能而形成耐受有關。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3627106