目的：sIL-4R蛋白的臨床Ⅰ/Ⅱ期試驗(yàn)，證實(shí)導(dǎo)入外源性的sIL-4R減少糖皮質(zhì)激素劑量，甚至可用于SRA的治療。但sIL-4R存在純化工藝復(fù)雜，且應(yīng)用劑量大，長期反復(fù)應(yīng)用又容易產(chǎn)生抗sIL-4R抗體等不利因素。為了克服上述缺陷，我們嘗試構(gòu)建sIL-4R基因腺病毒載體，應(yīng)用其來基因治療重癥哮喘或SRA。方法：本實(shí)驗(yàn)利用卵蛋白鼻腔滴注的方法，復(fù)制出BALB/c小鼠的哮喘模型，采用半定量RT-PCR的方法，檢測地塞米松腹腔內(nèi)注射后不同時(shí)間內(nèi)IL-4R和sIL-4R mRNA水平的變化；BALB/c小鼠的脾臟細(xì)胞懸液與5ng／ml的IL-4共孵育4小時(shí)，采用TRIzol一步法提取脾細(xì)胞的RNA，RT-巢式PCR獲得小鼠的sIL-4R基因并測序；應(yīng)用分子克隆技術(shù)構(gòu)建sIL-4R基因腺病毒載體，并經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)與腺病毒骨架載體PJM17共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，獲得重組腺病毒。結(jié)果：（l）地塞米松對(duì)IL-4Rα mRNA、sIL-4R mRNA的影響地塞米松治療組及陽性對(duì)照組哮喘小鼠各時(shí)相點(diǎn)肺組織中IL-4Rα mRNA基因條帶與內(nèi)參β-actin的灰度相對(duì)值行各組間及組內(nèi)相對(duì)灰度值t檢驗(yàn)，結(jié)果示p值均大... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市211工程院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
英文縮寫
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前言
材料
第一部分:糖皮質(zhì)激素對(duì)哮喘小鼠肺組織sIL-4受體作用的研究
    方法
    結(jié)果
第二部分：sIL-4受體基因的克隆及鑒定
    方法
    結(jié)果
第三部分：重組sIL-4R腺病毒載體的構(gòu)建和包裝
    方法
    結(jié)果
討論
小結(jié)
"><參考文獻(xiàn)>
致謝
綜述一：激素抵抗型哮喘的發(fā)病機(jī)理和治療
綜述二：白介素4受體（IL-4R）與支氣管哮喘
附錄



本文編號(hào)：3611937