背景與目的：TOLL樣受體（TLRs）廣泛分布于人的氣道上皮細(xì)胞中,它們介導(dǎo)了病原微生物所致呼吸道感染時(shí)的氣道炎癥反應(yīng)。單免疫球蛋白樣白介素1受體相關(guān)蛋白（SIGIRR）是TIRs超家族成員,它可以負(fù)性調(diào)節(jié)TLR/IL-1受體介導(dǎo)的固有免疫應(yīng)答。本實(shí)驗(yàn)是以人氣道上皮細(xì)胞株H292作為研究對(duì)象,明確SIGIRR在人氣道上皮細(xì)胞中發(fā)揮的作用及可能的細(xì)胞內(nèi)機(jī)制。方法：1. SIGIRR的亞細(xì)胞定位研究（1）構(gòu)建一個(gè)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）標(biāo)記的重組真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒載體（SIGIRR-EGFP）,并經(jīng)測(cè)序證實(shí)。（2）運(yùn)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法,將重組質(zhì)粒（SIGIRR-EGFP）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染H292細(xì)胞,在激光共聚焦顯微鏡下,進(jìn)行亞細(xì)胞定位研究；并以空質(zhì)粒pEGFP-N1轉(zhuǎn)染的H292細(xì)胞（EH292）、未轉(zhuǎn)染的H292細(xì)胞（H292）對(duì)照。（3）采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法進(jìn)行亞細(xì)胞定位對(duì)照,進(jìn)一步證明SIGIRR在H292細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位情況。2.致炎因子的ELISA檢測(cè)（1）通過(guò)800μg/ml的G418篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞,單克隆化操作后,利用熒光定量RT-PCR挑選出SIGIRR表達(dá)相對(duì)較強(qiáng)的細(xì)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：125 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
英文縮寫(xiě)索引
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中文摘要
正文 SIGIRR對(duì)氣道上皮TOLL樣受體致炎信號(hào)通路的作用及機(jī)制研究
    前言
    第一章 SIGIRR對(duì)氣道上皮TOLL樣受體致炎信號(hào)通路的作用
        第一節(jié) 真核表達(dá)載體SIGIRR-EGFP的構(gòu)建與鑒定
            材料與方法
            結(jié)果
        第二節(jié) 氣道上皮細(xì)胞中SIGIRR亞細(xì)胞定位研究
            材料與方法
            結(jié)果
        第三節(jié) SIGIRR過(guò)表達(dá)對(duì)氣道上皮細(xì)胞致炎因子產(chǎn)生的影響
            材料與方法
            結(jié)果
        討論
    第二章 SIGIRR對(duì)氣道上皮TOLL樣受體致炎信號(hào)通路調(diào)控機(jī)制研究
        第一節(jié) SIGIRR過(guò)表達(dá)對(duì)氣道上皮細(xì)胞TLR4、5、9表達(dá)的影響
            材料與方法
            結(jié)果
        第二節(jié) SIGIRR與Toll樣受體接頭分子MyD88的相互作用
            材料與方法
            結(jié)果
        討論
    全文結(jié)論
    致謝
    參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述 TOLL樣受體介導(dǎo)免疫應(yīng)答的負(fù)性調(diào)節(jié)
    參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文
英文論著



本文編號(hào)：3519256