發(fā)布時間：2021-11-23 23:14

　　目的探討銅藍(lán)蛋白（Cp）在石英誘導(dǎo)的人胚肺成纖維細(xì)胞（HELF）中JNK/ERK/AP-1信號通路改變中的作用。方法分別在100μg/ml石英作用前1 h、同時和作用后1h加入30μg/ml Cp,同時設(shè)立單獨用石英和單獨用Cp處理以及不做任何處理的細(xì)胞組,刺激細(xì)胞24 h后,用噻唑藍(lán)（MTT）比色法觀察Cp對石英誘導(dǎo)的HELF細(xì)胞增殖的影響。用100μg/ml石英分別作用于HELF細(xì)胞、轉(zhuǎn)染JNK顯性失活突變體質(zhì)粒的HELF細(xì)胞（DN-JNK）和轉(zhuǎn)染ERK顯性失活突變體質(zhì)粒的HELF細(xì)胞（DN-ERK）24 h;用100μg/ml石英作用1 h后,加入30μg/ml Cp作用24 h;同時設(shè)立不做任何處理的對照組。用MTT法檢測分別抑制JNK和ERK后對細(xì)胞增殖的影響;用蛋白免疫印跡（Western blotting）實驗檢測JNK、ERK、c-Jun、c-Fos及其磷酸化水平的改變。結(jié)果石英作用1 h后加入Cp,對石英誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用,后續(xù)的實驗選擇這種作用模式。Cp可以明顯增加JNK、ERK蛋白及磷酸化ERK（pERK）、磷酸化JNK（p-JNK）、磷酸化c-Jun（p-... 

【文章來源】：衛(wèi)生研究. 2014,43(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

抑制JNK后觀察Cp對石英誘導(dǎo)的p-JNK、

第2期葉萌，等.銅藍(lán)蛋白在石英誘導(dǎo)的JNK/EＲK/AP-1信號通路改變中的作用201(1)與HELF+silica組比較，P＜0.05;(2)與HELF+silica+Cp組比較，P＜0.05圖3MTT實驗觀察抑制JNK后Cp對HELF細(xì)胞增殖的影響Figure3TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingJNK果表明Cp可以明顯促進(jìn)石英誘導(dǎo)的EＲK蛋白、p-EＲK、p-c-Jun和p-c-Fos水平的增加。轉(zhuǎn)染DN-EＲK質(zhì)粒后，石英以及石英和Cp同時誘導(dǎo)的p-EＲK和p-c-Fos的增加被抑制，p-c-Jun蛋白水平的增加沒有被抑制(圖4)。抑制EＲK后，Cp及石英誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖沒有被完全抑制，但低于Cp和石英共同作用的空載體組(圖5)。說明Cp通過上游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)EＲK蛋白及其磷酸化的增加，且通過EＲK/c-Fos通路進(jìn)一步增強(qiáng)石英的促細(xì)胞增殖作用。1:HELF;2:HELF+silica;3:HELF+silica+Cp;4:DN-EＲK;5:DN-EＲK+silica;6:DN-EＲK+silica+Cp圖4抑制EＲK后觀察Cp對石英誘導(dǎo)的p-EＲK、c-Jun、p-c-Jun、c-Fos和p-c-Fos蛋白水平的影響Figure4TheeffectsofCponthelevelsofp-EＲK，c-Jun，p-c-Jun，c-Fos和p-c-FosinducedbysilicaafterinhibitingEＲK(1)與HELF+silica+Cp比較，P＜0.05圖5MTT實驗觀察抑制EＲK后Cp對HELF細(xì)胞增殖的影響Figure5TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingEＲK3討論塵肺病是由于長期吸入石英粉塵所致的以肺部彌漫性纖維化為主的一種疾玻Cp主要是由肝臟合成和分泌的，所以本次體外實驗采用體外給予Cp的方法。顯性失活突變體技術(shù)是細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中常用的技術(shù)，主要通過競爭性作用抑制目的蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果表明，100μg/ml石英處理1h后再給予30μg/mlCp，Cp對石英誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，這種作用與JNK/c-Jun和c-Fos及EＲK/c-Fos通路有關(guān)。

第2期葉萌，等.銅藍(lán)蛋白在石英誘導(dǎo)的JNK/EＲK/AP-1信號通路改變中的作用201(1)與HELF+silica組比較，P＜0.05;(2)與HELF+silica+Cp組比較，P＜0.05圖3MTT實驗觀察抑制JNK后Cp對HELF細(xì)胞增殖的影響Figure3TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingJNK果表明Cp可以明顯促進(jìn)石英誘導(dǎo)的EＲK蛋白、p-EＲK、p-c-Jun和p-c-Fos水平的增加。轉(zhuǎn)染DN-EＲK質(zhì)粒后，石英以及石英和Cp同時誘導(dǎo)的p-EＲK和p-c-Fos的增加被抑制，p-c-Jun蛋白水平的增加沒有被抑制(圖4)。抑制EＲK后，Cp及石英誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖沒有被完全抑制，但低于Cp和石英共同作用的空載體組(圖5)。說明Cp通過上游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)EＲK蛋白及其磷酸化的增加，且通過EＲK/c-Fos通路進(jìn)一步增強(qiáng)石英的促細(xì)胞增殖作用。1:HELF;2:HELF+silica;3:HELF+silica+Cp;4:DN-EＲK;5:DN-EＲK+silica;6:DN-EＲK+silica+Cp圖4抑制EＲK后觀察Cp對石英誘導(dǎo)的p-EＲK、c-Jun、p-c-Jun、c-Fos和p-c-Fos蛋白水平的影響Figure4TheeffectsofCponthelevelsofp-EＲK，c-Jun，p-c-Jun，c-Fos和p-c-FosinducedbysilicaafterinhibitingEＲK(1)與HELF+silica+Cp比較，P＜0.05圖5MTT實驗觀察抑制EＲK后Cp對HELF細(xì)胞增殖的影響Figure5TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingEＲK3討論塵肺病是由于長期吸入石英粉塵所致的以肺部彌漫性纖維化為主的一種疾玻Cp主要是由肝臟合成和分泌的，所以本次體外實驗采用體外給予Cp的方法。顯性失活突變體技術(shù)是細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中常用的技術(shù)，主要通過競爭性作用抑制目的蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果表明，100μg/ml石英處理1h后再給予30μg/mlCp，Cp對石英誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，這種作用與JNK/c-Jun和c-Fos及EＲK/c-Fos通路有關(guān)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3514805