目的:特發(fā)性肺纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）是一種肺間質(zhì)性疾病,因其病因復雜,發(fā)病機制不明而使其診斷和治療面臨巨大的困難�；|(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinases,MMPs）尤其是 MMP-2,MMP-9,MMP-14 目前認為在 IPF的疾病進程中起到促進作用。本文通過設計合成一種新型近紅外探針,可用于實時動態(tài)監(jiān)測IPF進程中MMPs變化,并抑制MMPs活性達到緩解IPF疾病進展的目的。方法:化學合成目標探針,花菁為熒光團,MMPs抑制劑異羥肟酸為定位基團,二者通過點擊化學連接到一起。利用探針熒光和MMP-2,MMP-9,MMP-14熒光直標一抗熒光共定位性評估探針識別MMPs能力。構(gòu)建TGF-β1刺激24,48,72小時不同時期細胞纖維化模型,觀察探針熒光強度變化,并用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）實驗定量檢測MMP-2,MMP-9和MMP-14含量。構(gòu)建正常組和博萊霉素造模3,7,9,14,21,28天小鼠,用探針觀察小鼠肺纖維化不同時期,探針熒光強度變化。結(jié)果:化合物IRGP-710經(jīng)核磁共振和質(zhì)譜確定是所設計... 

【文章來源】：濱州醫(yī)學院山東省

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１探針設計策略和反應機理

?加入不同濃度的ＭＭＰ－１４?（Ｏ－ｌｍｇ／ｍｌ）處理時探針在７４０－８４０ｎｍ處出現(xiàn)強烈的??熒光（圖２ｂ）。如圖２ｃ所示，當與潛在的干擾物質(zhì)反應時，探針僅對ＭＭＰ－２，??ＭＭＰ－９和ＭＭＰ－１４有非常高水平的熒光發(fā)射。與ＭＭＰｓ家族其他蛋白酶（ＭＭＰ－??ｌ，ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－７）無熒光產(chǎn)生。這些結(jié)果表明，探針ＩＲＧＰ－７１０是一種近紅外熒??光探針，具有高選擇性檢測ＭＭＰ－２，ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１４的潛力，是肺纖維化中ＭＭＰｓ??檢測的合適候選者。??３???ｂ???ｃ????４ｌｌ８＇［?ｆｆｌ?碼?Ｍｉ??—／Ａ?ｆＴ＇?Ｉ?Ｉ??丨：??５５０?６（Ｋ）?６５０?７ＩＭ）?７５０?Ｘ００?？５？?７５０?７８０?８１０?ＷＯ?〇ｌｔｒ．?Ｊ．．Ｌ?—ｒｘ，?Ｍｍｒ，?ＪＪ—＿＊－Ｊ??Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ?（ｎｍ）?Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ?（ｎｍ）??圖２探針ＩＲＧＰ－７１０光學性能和選擇性。ａ）?ＩＲＧＰ－７１０?（１０?ｐＭ）在與重組人ＭＭＰ－２，?ＭＭＰ－９和??ＭＭＰ－１４?（０．５?ｍｇ／ｍｌ）孵育３０分鐘后測得紫外吸收光譜。ｂ）探針ＩＲＧＰ－７１０?（１０?ｐＭ）與不同濃??度梯度的ＭＭＰ－１４?（０－ｌｍｇ／ｍｌ）孵育３０分鐘后測得熒光光譜曲線，激發(fā)波長７７６ｎｍ。ｃ）探??針ＩＲＧＰ－７１０選擇性。ＩＲＧＰ－７１０與待測干擾物孵育３０分鐘后測得。１，重組人ＭＭＰ－１?（０．５??ｍｇ／ｍｌ）；?２，重組人?ＭＭＰ－２?（０．５ｍｇ／ｍｌ）；?３，重組人?ＭＭＰ－３?（０．５ｍｇ／ｍｌ）；?４，重組人?ＭＭＰ－??７?（０．５ｍｇ／ｍｌ）；?５

我們將ＩＲＧＰ－７１０?（１０ｎＭ，１００ｐｌ，ＤＭＳＯ：生理鹽水＝１：９９，ｖ／ｖ）遙續(xù)注射小??鼠７天，對照組注射相同體積相同濃度鹽水。將小鼠處死后取心，肝，脾，肺，腎??做Ｈ＆Ｅ切片，與正常小鼠病理結(jié)果相比探針組無明顯異質(zhì)性（圖３ｃ）。綜合以上??結(jié)果，我們有理由相信ＩＲＧＰ－７１０生物毒性低，可用于后續(xù)細胞和生物實驗。??ａ?ｂ??ｌ．ｏＬｆｆｌＴｌＴＴＩｌＴｒｒ?酬Ａ５４０■?ＩＭＲ－Ｍ｜?＇?＊［??丨＿Ｂ丨巴??…、?〇?１２?２４?４８?７２??＾?＾?＾?．ｒｉｍｃ（ｈ＞??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ??ｃ?Ｈｅａｒｔ?Ｌｉｖｅｒ?Ｓｐｌｅｅｎ?Ｌｕｎｇ?Ｋｉｄｎｅｙ??！謂圓＿＿＿??！畫＿圓＿＿畫??！■圍畫：＿國??圖３探針丨ＲＧＰ－７Ｉ０生物毒性。ａ）探針丨ＲＧＰ－７丨０與Ａ５４９，丨ＭＲ－９０，?ＲＬＥ－６ＴＮ細胞共孵育２４??小時后細胞活力。ｂ）濃度為１０ｐＭ的探針與Ａ５４９，ＩＭＲ－９０，ＲＬＥ－６ＴＮ細胞共孵育１２，?２４，?４８，??７２小時后細胞活力。ｃ）小鼠連續(xù)注射ＩＲＧＰ－７１０（ｌ〇ｎＭ，２０〇ｎｌ，ＤＭＳＯ：生理鹽水＝丨：９９，ｖ／ｖ）??７天后，取心，肝，脾，肺，腎Ｈ＆Ｅ切片。標尺為??Ｆｉｇｕｒｅ?３?Ｐｒｏｂｅ?ＩＲＧＰ－７１０?ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ｔｏｘｉｃｉｔｙ．?ａ）Ｔｈｅ?ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ｐｒｏｂｅ?ＩＲＧＰ－７１０?ｗａｓ?ｉｎｃｕｂａｔｅｄ??ｗｉｔｈ?Ａ５４９


本文編號：3505217