本文關鍵詞：PAI-1SiRNA對實驗性肺纖維化大鼠Caspase-3表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：肺纖維化是一種以彌漫性肺泡炎和肺泡結構紊亂并最終導致肺功能喪失為特征的一種疾病，是肺組織對損傷的一種動態(tài)的病理修復過程。其病理特點包括間質細胞增生、細胞外基質(extracellular matrix, ECM)異常沉積及肺組織結構的重構，其中ECM代謝失衡在肺纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。在損傷修復應答反應中，成纖維細胞，各種各樣的結締組織細胞和關鍵的效應因子，被募集到損傷的組織中，在那里，促進ECM沉積和促進其降解因素的平衡，決定了損傷肺組織的發(fā)生和發(fā)展。肌纖維母細胞的分泌、機化、再重建以及收縮ECM、促進傷口的閉合以及上皮的再生。隨著損傷組織的正常修復，凋亡使成纖維細胞/肌纖維母細胞的數(shù)量大量減少。肌纖維母細胞的凋亡失敗和損傷組織的病理修復，最終導致了組織的纖維化。纖溶酶和基質金屬蛋白酶是降解細胞外基質的兩種主要酶類。纖溶酶是一種絲氨酸蛋白酶，具有纖維蛋白溶解活性，，是由纖溶酶原激活物激活纖溶酶原裂解而產生，纖溶酶能夠裂解細胞外基質成分，例如纖維結合蛋白，活化的生長因子以及別的基質蛋白酶。肺間質纖維化以及其他以纖維性變?yōu)樘卣鞯募膊”徽J為與纖溶酶原的活性被纖溶酶原激活物抑制劑-1(Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)所抑制有關。PAI-1促進組織纖維化的機制還未完全清楚。動物模型已證實過度表達PAI-1基因的小鼠博萊霉素誘導后肺纖維化程度明顯加重。 RNAi的發(fā)現(xiàn)是生物界的一場革命，SiRNA技術是一種以調節(jié)轉錄后為目的的新型調控技術，通過合成特異性小分子RNA實現(xiàn)靶基因抑制，已作為基因功能研究和基因治療的一種新手段。 本研究中，我們利用PAI-1SiRNA來沉默博來霉素誘導的肺纖維化大鼠模型中的PAI-1基因的表達，觀察肺纖維程度以及Caspase-3表達的變化。以便進一步研究肺纖維化的與凋亡的關系。 方法：SD健康雄性大鼠72只，體重（200±20）g，采用隨機數(shù)字表法將實驗動物分成4組，鹽水組(Sham組)、博來霉素組(B組)、BLM+PAI-1SiRNA組(B+P組)和BLM+SiRNA陰對組(B+N組)，每組18只。無水乙醚局部麻醉，仰臥位固定，常規(guī)消毒頸部皮膚，行頸正中切口，分離組織，暴露氣管，B組、B+P組和B+N組按5mg/kg抽取BLM液0.2～0.3mL(生理鹽水溶解),穿刺并注入氣管內,鹽水組注入0.2～0.3mL等體積生理鹽水。 B+P組每周兩次氣管內注入PAI-1SiRNA（7.5nmol,0.2ml高壓過的去離子水溶），B+N組每周兩次氣管內注入陰對的SiRNA（7.5nmol,0.2ml高壓過的去離子水溶），Sham組和B組每周兩次氣管內注入0.2ml的生理鹽水。上述4組動物分別于第7、14、28天每組各處死6只。右下肺固定于4%多聚甲醛,石蠟切片供組織學檢查（HE染色，Masson染色）及免疫組化；右中葉留取做Real time PCR和羥脯氨酸（HYP）的測定，行PCR的組織于液氮中保存，行HYP的組織于-80℃保存。通過HE染色，Masson染色和HYP的測定，來評價治療效果，肺泡炎和肺纖維化程度用Szapiel法病理分級。免疫組化測定Caspase-3在肺組織的表達，并對Caspase-3積分光密度總和進行分析。Real time PCR測定肺組織Caspase-3mRNA的含量。實驗結果及數(shù)據資料采用Spss13.0軟件進行統(tǒng)計學分析。 結果： 1肺組織病理分析結果:B組各時間點的肺泡炎程度顯著高于Sham組（P0.01），B組14天、28天肺纖維化程度顯著高于正常對照組（P0.01），表明模型復制成功。B+P組各時間點肺泡炎程度較Ｂ組減輕（P0.01），14天、28天肺纖維化程度較Ｂ組明顯減輕（P0.01），表明治療有效。B組和B+N組無明顯差別（P㧐0.05）。 2肺組織羥脯氨酸（HYP）含量的變化：Ｂ組大鼠肺組織羥脯氨酸含量隨造模時間的延長呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢，B組各時間點羥脯氨酸含量明顯高于Sham組（P0.01），B+P組羥脯氨酸呈低水平升高趨勢，各時間點羥脯氨酸含量均顯著低于B組（P0.01），B組和B+N組無明顯差別（P㧐0.05）。 3免疫組化結果：B組7天時Caspase-3表達較Sham組增加不明顯，14天、28天較Sham組表達增加明顯（P0.01），B+P組7天時較B組變化不明顯，14天、28天較B組表達明顯減少（P0.01）。B組和B+N組各時間點無明顯差別（P㧐0.05）。 4Real time PCR結果：7天時B+P組的Caspase-3mRNA較B組開始明顯增加，較B組有顯著的統(tǒng)計學差異（P0.01），14天和28天也較B組增高，有統(tǒng)計學差異(P0.01）。B組和B+N組各時間點無明顯差別(P0.05)。 結論： 1PAI-1siRNA氣管內注入博來霉素大鼠能減少膠原的合成，阻滯肺纖維化的發(fā)展。 2PAI-1siRNA可能通過上調Caspase-3的表達水平發(fā)揮治療肺纖維化的作用。
【關鍵詞】：肺纖維化 纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1） RNA干擾（RNAi） Caspase-3
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R563.9
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11
• 材料與方法11-19
• 結果19-22
• 附圖22-28
• 附表28-30
• 討論30-32
• 結論32
• 參考文獻32-35
• 綜述 SiRNA 在呼吸系統(tǒng)疾病治療中的進展35-51
• 參考文獻43-51
• 致謝51-52
• 個人簡歷52

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據庫 前2條

1 張彥萍,曹書穎;PAI-1與肺纖維化[J];國外醫(yī)學.呼吸系統(tǒng)分冊;2005年05期

2 孔璐;高艷青;王繼峰;牛建昭;張雪溪;;博萊霉素致肺纖維化大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞凋亡[J];中國醫(yī)學科學院學報;2007年06期

  本文關鍵詞：PAI-1SiRNA對實驗性肺纖維化大鼠Caspase-3表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：349083