本文關(guān)鍵詞：PAI-1SiRNA對實驗性肺纖維化大鼠Caspase-3表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：肺纖維化是一種以彌漫性肺泡炎和肺泡結(jié)構(gòu)紊亂并最終導(dǎo)致肺功能喪失為特征的一種疾病，是肺組織對損傷的一種動態(tài)的病理修復(fù)過程。其病理特點(diǎn)包括間質(zhì)細(xì)胞增生、細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)異常沉積及肺組織結(jié)構(gòu)的重構(gòu)，其中ECM代謝失衡在肺纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。在損傷修復(fù)應(yīng)答反應(yīng)中，成纖維細(xì)胞，各種各樣的結(jié)締組織細(xì)胞和關(guān)鍵的效應(yīng)因子，被募集到損傷的組織中，在那里，促進(jìn)ECM沉積和促進(jìn)其降解因素的平衡，決定了損傷肺組織的發(fā)生和發(fā)展。肌纖維母細(xì)胞的分泌、機(jī)化、再重建以及收縮ECM、促進(jìn)傷口的閉合以及上皮的再生。隨著損傷組織的正常修復(fù)，凋亡使成纖維細(xì)胞/肌纖維母細(xì)胞的數(shù)量大量減少。肌纖維母細(xì)胞的凋亡失敗和損傷組織的病理修復(fù)，最終導(dǎo)致了組織的纖維化。纖溶酶和基質(zhì)金屬蛋白酶是降解細(xì)胞外基質(zhì)的兩種主要酶類。纖溶酶是一種絲氨酸蛋白酶，具有纖維蛋白溶解活性，，是由纖溶酶原激活物激活纖溶酶原裂解而產(chǎn)生，纖溶酶能夠裂解細(xì)胞外基質(zhì)成分，例如纖維結(jié)合蛋白，活化的生長因子以及別的基質(zhì)蛋白酶。肺間質(zhì)纖維化以及其他以纖維性變?yōu)樘卣鞯募膊”徽J(rèn)為與纖溶酶原的活性被纖溶酶原激活物抑制劑-1(Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)所抑制有關(guān)。PAI-1促進(jìn)組織纖維化的機(jī)制還未完全清楚。動物模型已證實過度表達(dá)PAI-1基因的小鼠博萊霉素誘導(dǎo)后肺纖維化程度明顯加重。 RNAi的發(fā)現(xiàn)是生物界的一場革命，SiRNA技術(shù)是一種以調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄后為目的的新型調(diào)控技術(shù)，通過合成特異性小分子RNA實現(xiàn)靶基因抑制，已作為基因功能研究和基因治療的一種新手段。 本研究中，我們利用PAI-1SiRNA來沉默博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠模型中的PAI-1基因的表達(dá)，觀察肺纖維程度以及Caspase-3表達(dá)的變化。以便進(jìn)一步研究肺纖維化的與凋亡的關(guān)系。 方法：SD健康雄性大鼠72只，體重（200±20）g，采用隨機(jī)數(shù)字表法將實驗動物分成4組，鹽水組(Sham組)、博來霉素組(B組)、BLM+PAI-1SiRNA組(B+P組)和BLM+SiRNA陰對組(B+N組)，每組18只。無水乙醚局部麻醉，仰臥位固定，常規(guī)消毒頸部皮膚，行頸正中切口，分離組織，暴露氣管，B組、B+P組和B+N組按5mg/kg抽取BLM液0.2～0.3mL(生理鹽水溶解),穿刺并注入氣管內(nèi),鹽水組注入0.2～0.3mL等體積生理鹽水。 B+P組每周兩次氣管內(nèi)注入PAI-1SiRNA（7.5nmol,0.2ml高壓過的去離子水溶），B+N組每周兩次氣管內(nèi)注入陰對的SiRNA（7.5nmol,0.2ml高壓過的去離子水溶），Sham組和B組每周兩次氣管內(nèi)注入0.2ml的生理鹽水。上述4組動物分別于第7、14、28天每組各處死6只。右下肺固定于4%多聚甲醛,石蠟切片供組織學(xué)檢查（HE染色，Masson染色）及免疫組化；右中葉留取做Real time PCR和羥脯氨酸（HYP）的測定，行PCR的組織于液氮中保存，行HYP的組織于-80℃保存。通過HE染色，Masson染色和HYP的測定，來評價治療效果，肺泡炎和肺纖維化程度用Szapiel法病理分級。免疫組化測定Caspase-3在肺組織的表達(dá)，并對Caspase-3積分光密度總和進(jìn)行分析。Real time PCR測定肺組織Caspase-3mRNA的含量。實驗結(jié)果及數(shù)據(jù)資料采用Spss13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果： 1肺組織病理分析結(jié)果:B組各時間點(diǎn)的肺泡炎程度顯著高于Sham組（P0.01），B組14天、28天肺纖維化程度顯著高于正常對照組（P0.01），表明模型復(fù)制成功。B+P組各時間點(diǎn)肺泡炎程度較Ｂ組減輕（P0.01），14天、28天肺纖維化程度較Ｂ組明顯減輕（P0.01），表明治療有效。B組和B+N組無明顯差別（P㧐0.05）。 2肺組織羥脯氨酸（HYP）含量的變化：Ｂ組大鼠肺組織羥脯氨酸含量隨造模時間的延長呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢，B組各時間點(diǎn)羥脯氨酸含量明顯高于Sham組（P0.01），B+P組羥脯氨酸呈低水平升高趨勢，各時間點(diǎn)羥脯氨酸含量均顯著低于B組（P0.01），B組和B+N組無明顯差別（P㧐0.05）。 3免疫組化結(jié)果：B組7天時Caspase-3表達(dá)較Sham組增加不明顯，14天、28天較Sham組表達(dá)增加明顯（P0.01），B+P組7天時較B組變化不明顯，14天、28天較B組表達(dá)明顯減少（P0.01）。B組和B+N組各時間點(diǎn)無明顯差別（P㧐0.05）。 4Real time PCR結(jié)果：7天時B+P組的Caspase-3mRNA較B組開始明顯增加，較B組有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P0.01），14天和28天也較B組增高，有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01）。B組和B+N組各時間點(diǎn)無明顯差別(P0.05)。 結(jié)論： 1PAI-1siRNA氣管內(nèi)注入博來霉素大鼠能減少膠原的合成，阻滯肺纖維化的發(fā)展。 2PAI-1siRNA可能通過上調(diào)Caspase-3的表達(dá)水平發(fā)揮治療肺纖維化的作用。
【關(guān)鍵詞】：肺纖維化 纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1） RNA干擾（RNAi） Caspase-3
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R563.9
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11
• 材料與方法11-19
• 結(jié)果19-22
• 附圖22-28
• 附表28-30
• 討論30-32
• 結(jié)論32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 綜述 SiRNA 在呼吸系統(tǒng)疾病治療中的進(jìn)展35-51
• 參考文獻(xiàn)43-51
• 致謝51-52
• 個人簡歷52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張彥萍,曹書穎;PAI-1與肺纖維化[J];國外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊;2005年05期

2 孔璐;高艷青;王繼峰;牛建昭;張雪溪;;博萊霉素致肺纖維化大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞凋亡[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報;2007年06期

  本文關(guān)鍵詞：PAI-1SiRNA對實驗性肺纖維化大鼠Caspase-3表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：349083