目的:通過(guò)體外培養(yǎng)過(guò)表達(dá)SOCS1的未成熟DCs（imDCs）,并將不同類(lèi)型的DCs及不同濃度的DC-SOCS1回輸干預(yù)COPD小鼠,觀察其BALF及肺組織中Th17細(xì)胞因子的變化,進(jìn)一步闡明過(guò)表達(dá)SOCS1的imDCs通過(guò)調(diào)節(jié)Th17分泌的相關(guān)細(xì)胞因子在COPD免疫調(diào)節(jié)中的作用。方法:1、從小鼠脛骨和股骨中洗出骨髓細(xì)胞,用白介素-4、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)im DCs形成。2、用過(guò)表達(dá)SOCS1的慢病毒感染原代分離培養(yǎng)第5天但未經(jīng)LPS刺激的imDCs,構(gòu)建過(guò)表達(dá)SOCS1的imDCs,即DCs-SOCS1,WB檢測(cè)DCs-SOCS1內(nèi)SOCS1的表達(dá)。3、細(xì)胞培養(yǎng)第7天加入LPS誘導(dǎo)成熟,對(duì)所培養(yǎng)的細(xì)胞,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)和掃描電鏡分別對(duì)其表面分子標(biāo)記物CD80、CD83和細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行鑒定。4、將42只C57BL/6小鼠隨機(jī)分成7個(gè)組,每組6只,分別為煙熏第1天回輸NS組,煙熏第1天回輸DCs-SOCS1（1×10⁶）組,煙熏第1天回輸DCs-SOCS1（2×10⁶）組,煙熏第1天回輸imDCs（1×10⁶）組... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

COPD模型構(gòu)建

6回輸（0.1ml/10g）（煙熏第 7 天注射）圖4 細(xì)胞過(guò)繼免疫COPD小鼠1.2.8 ELISA 檢測(cè)各組小鼠 BALF、肺組織中 IL-21 濃度變化1.2.8.1 樣本收集處理（1）BALF：用無(wú)菌管收集樣本，2000rpm 離心 20min，收集上清。（2）肺組織：切割樣本后，稱(chēng)取重量。加入適量的 PBS，用液氮冷凍保存。樣本在 4℃的條件下融化。加入 PBS，PBS 的量是組織的九分之一。用勻漿器將樣本勻漿，2000rpm 離心 20min，最后小心收集上清液。1.2.8.2 ELISA 檢測(cè) IL-21 濃度按照 ELISA 試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法各數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示

遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 袁2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1 骨髓源 DCs 的提取、培養(yǎng)及鑒定將所需的骨髓細(xì)胞從小鼠脛骨和股骨中洗出，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，向骨髓細(xì)胞中入白介素-4、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)其向 imDCs 方向分化。觀察到細(xì)呈小圓形，無(wú)偽足樣突起(圖 5A-E)，在細(xì)胞培養(yǎng)第 7 天加入 LPS 誘導(dǎo)成熟，觀察胞發(fā)現(xiàn)其伸出偽足樣突起(圖 5F)。掃描電鏡觀察該類(lèi)細(xì)胞伸出樹(shù)枝狀突起，此為典mDCs 形態(tài)(圖 8 ) 。進(jìn)一步用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) DCs 成熟標(biāo)志物 CD80、CD83 表達(dá)結(jié)果顯示 CD80 表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞為 56.34%(圖 6)，CD83 表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞為 78%(圖 7)。上結(jié)果均表明：本實(shí)驗(yàn)提取、培養(yǎng)的細(xì)胞主要為 imDCs，且經(jīng) LPS 刺激后能正常熟。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3466519