目的:信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子1（STAT1）是STAT家族中第一個被發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子,參與IFN的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程,為先天性免疫所必需。IFN-γ等細胞因子通過JAK-STAT途徑激活STAT1而誘導(dǎo)目的基因表達,參與細胞因子介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程,導(dǎo)致氣道的炎癥和高反應(yīng)性,而支氣管哮喘氣道炎癥常與氣道上皮細胞STAT1途徑的信號傳導(dǎo)異常有關(guān)。本研究通過設(shè)計針對STAT1的發(fā)夾樣RNA干擾重組體,用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染IFN-γ刺激后的人氣道上皮細胞（16HBE）,研究其對16HBE細胞中STAT1蛋白表達的影響,檢測其干擾活性,為探討支氣管哮喘等炎癥性疾病的基因治療奠定基礎(chǔ)。方法:本研究分兩部分進行:1. STAT1特異性siRNA真核表達載體的構(gòu)建:根據(jù)GeneBank數(shù)據(jù)庫提供的STAT1基因兩種變異體的共同核苷酸序列,按照Tuschl設(shè)計原則,選擇設(shè)計雙鏈siRNA,最后選擇兩條片段作為STAT1基因干擾片段;另設(shè)計一條由任一個片段隨機重排而成的陰性對照;再分別轉(zhuǎn)化為能表達其shRNA的互補DNA序列,經(jīng)退火形成雙鏈,將其連接到帶有卡那霉素抗性和增強綠色熒光蛋白的pGenesil-1.1真核表達載... 

【文章來源】：西南醫(yī)科大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

pGenesil-1.1載體Fig.1pGenesil-1.1vector

質(zhì)粒線性化的瓊脂糖凝膠鑒定1489bp


本文編號：3459805