經(jīng)過(guò)采取傳統(tǒng)的隔離和對(duì)癥治療等措施,SARS疫情在2003年6月份得到控制,但SARS（?）可能從動(dòng)物宿主跨種傳播導(dǎo)致SARS再次爆發(fā)�？贵w尤其是抗體的中和活性滴度以及維持時(shí)間決定著機(jī)體對(duì)SARS病毒的再次感染是否具有免疫保護(hù)力,SARS-COV體液免疫研究還有些未知領(lǐng)域：針對(duì)結(jié)構(gòu)蛋白的抗體動(dòng)態(tài)變化規(guī)律,抗體抵御病原體的作用機(jī)制等。為了揭示SARS康復(fù)者長(zhǎng)期的體液免疫記憶反應(yīng)規(guī)律,在SARS康復(fù)者康復(fù)后的第3個(gè)月、12個(gè)月、18個(gè)月、24個(gè)月、36個(gè)月,我們連續(xù)留取了19個(gè)康復(fù)者的血清標(biāo)本（還留取了其中4名康復(fù)者第5年的標(biāo)本）。用優(yōu)化的S蛋白、N蛋白、受體結(jié)合區(qū)（RBD）蛋白間接ELISA方法,與商品化試劑盒一起對(duì)上述標(biāo)本進(jìn)行了IgG抗體檢測(cè)。用假病毒中和方法進(jìn)行了抗體的中和活性檢測(cè)。我們的研究有以下發(fā)現(xiàn)：（1）S蛋白、N蛋白特異抗體下降趨勢(shì)有所不同。N蛋白特異抗體在第3個(gè)月到第12個(gè)月下降快,之后在稍高于閾值的低水平緩慢下降,而S蛋白特異性抗體從第3個(gè)月到第36個(gè)月在較高水平（相對(duì)于N蛋白）緩慢下降。（2）商品化的試劑盒檢測(cè)和S蛋白間接ELISA檢測(cè)的血清稀釋度分別為1：10和1：1... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 病毒的可能來(lái)源和跨種傳播
    1.2 SARS-CoV的主要結(jié)構(gòu)蛋白
        1.2.1 SARS-CoV S蛋白、受體和受體結(jié)合區(qū)(RBD)
        1.2.2 SARS-CoV N蛋白
    1.3 SARS-CoV的實(shí)驗(yàn)室診斷
    1.4 SARS-CoV的免疫應(yīng)答
        1.4.1 SARS-CoV的體液免疫反應(yīng)
        1.4.2 SARS-CoV的細(xì)胞免疫反應(yīng)
    1.5 本研究目的、意義和實(shí)驗(yàn)流程
        1.5.1 研究目的與意義
        1.5.2 本研究的實(shí)驗(yàn)流程
2 研究對(duì)象、實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 研究對(duì)象
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑、儀器和試劑配制
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 主要儀器
        2.2.4 常見(jiàn)試劑配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1. 大腸桿菌(E.coli)化學(xué)感受態(tài)的制備
        2.3.2 轉(zhuǎn)化
        2.3.3 質(zhì)粒的大量提取(QIAGEN試劑盒)
        2.3.4 瓊脂糖凝膠電泳
        2.3.5 質(zhì)粒定量
        2.3.6 pRBD質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞(用LIPOFECTAMINE 2000)
        2.3.7 ELISA初步檢測(cè)RBD表達(dá)
        2.3.8 RBD蛋白的純化與濃縮
        2.3.9 蛋白定量(Bio-Rad Protein Assay)
        2.3.10 聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)
        2.3.11 Western Blotting
        2.3.12 SARS-CoV IgG檢測(cè)(商品化試劑盒)
        2.3.13 S蛋白、N蛋白、RBD蛋白間接ELISA
        2.3.14 功能性假病毒的獲得
        2.3.15 功能性假病毒的滴度測(cè)定
        2.3.16 中和抗體檢測(cè)操作流程
    2.4 統(tǒng)計(jì)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 RBD質(zhì)粒瓊脂糖電泳
    3.2 ELISA初步檢測(cè)RBD轉(zhuǎn)染后的表達(dá)
    3.3 SDS-PAGE分析純化的RBD蛋白
    3.4 RBD蛋白免疫印跡
    3.5 RBD蛋白定量
    3.6 假病毒制備所用質(zhì)粒瓊脂糖電泳
    3.7 功能性假病毒的滴度測(cè)定
    3.8 SARS-CoV,S蛋白和N蛋白IgG動(dòng)態(tài)變化
    3.9 抗體的中和活性及與SARS-CoV、S蛋白IgG相關(guān)性
    3.10 RBD IgG抗體動(dòng)態(tài)變化以及與中和活性的相關(guān)性
    3.11 4名康復(fù)者第五年IgG抗體和抗體的中和活性檢測(cè)
4 討論
    4.1 SARS-CoV及其結(jié)構(gòu)蛋白抗體動(dòng)態(tài)變化
        4.1.1 S蛋白、N蛋白特異抗體動(dòng)態(tài)變化
        4.1.2 S蛋白間接ELISA的靈敏度高于商品化試劑盒
        4.1.3 SARS康復(fù)者抗體的中和活性
        4.1.4 S蛋白特異IgG抗體與中和活性相關(guān)性
        4.1.5 RBD蛋白特異IgG抗體與中和活性相關(guān)性
    4.2 抗體長(zhǎng)期存在機(jī)制與意義
        4.2.1 抗體長(zhǎng)期存在的機(jī)制
        4.2.2 抗體長(zhǎng)期存在的意義
5 小結(jié)
6 參考文獻(xiàn)
綜述 SARS研究概述
    綜述參考文獻(xiàn)
文章發(fā)表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3435113