經過采取傳統(tǒng)的隔離和對癥治療等措施,SARS疫情在2003年6月份得到控制,但SARS（?）可能從動物宿主跨種傳播導致SARS再次爆發(fā)�？贵w尤其是抗體的中和活性滴度以及維持時間決定著機體對SARS病毒的再次感染是否具有免疫保護力,SARS-COV體液免疫研究還有些未知領域：針對結構蛋白的抗體動態(tài)變化規(guī)律,抗體抵御病原體的作用機制等。為了揭示SARS康復者長期的體液免疫記憶反應規(guī)律,在SARS康復者康復后的第3個月、12個月、18個月、24個月、36個月,我們連續(xù)留取了19個康復者的血清標本（還留取了其中4名康復者第5年的標本）。用優(yōu)化的S蛋白、N蛋白、受體結合區(qū)（RBD）蛋白間接ELISA方法,與商品化試劑盒一起對上述標本進行了IgG抗體檢測。用假病毒中和方法進行了抗體的中和活性檢測。我們的研究有以下發(fā)現：（1）S蛋白、N蛋白特異抗體下降趨勢有所不同。N蛋白特異抗體在第3個月到第12個月下降快,之后在稍高于閾值的低水平緩慢下降,而S蛋白特異性抗體從第3個月到第36個月在較高水平（相對于N蛋白）緩慢下降。（2）商品化的試劑盒檢測和S蛋白間接ELISA檢測的血清稀釋度分別為1：10和1：1... 

【文章來源】：北京協和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學位級別】：博士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 病毒的可能來源和跨種傳播
    1.2 SARS-CoV的主要結構蛋白
        1.2.1 SARS-CoV S蛋白、受體和受體結合區(qū)(RBD)
        1.2.2 SARS-CoV N蛋白
    1.3 SARS-CoV的實驗室診斷
    1.4 SARS-CoV的免疫應答
        1.4.1 SARS-CoV的體液免疫反應
        1.4.2 SARS-CoV的細胞免疫反應
    1.5 本研究目的、意義和實驗流程
        1.5.1 研究目的與意義
        1.5.2 本研究的實驗流程
2 研究對象、實驗材料與實驗方法
    2.1 研究對象
    2.2 實驗材料、試劑、儀器和試劑配制
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 主要儀器
        2.2.4 常見試劑配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1. 大腸桿菌(E.coli)化學感受態(tài)的制備
        2.3.2 轉化
        2.3.3 質粒的大量提取(QIAGEN試劑盒)
        2.3.4 瓊脂糖凝膠電泳
        2.3.5 質粒定量
        2.3.6 pRBD質粒轉染293T細胞(用LIPOFECTAMINE 2000)
        2.3.7 ELISA初步檢測RBD表達
        2.3.8 RBD蛋白的純化與濃縮
        2.3.9 蛋白定量(Bio-Rad Protein Assay)
        2.3.10 聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)
        2.3.11 Western Blotting
        2.3.12 SARS-CoV IgG檢測(商品化試劑盒)
        2.3.13 S蛋白、N蛋白、RBD蛋白間接ELISA
        2.3.14 功能性假病毒的獲得
        2.3.15 功能性假病毒的滴度測定
        2.3.16 中和抗體檢測操作流程
    2.4 統(tǒng)計分析
3 實驗結果
    3.1 RBD質粒瓊脂糖電泳
    3.2 ELISA初步檢測RBD轉染后的表達
    3.3 SDS-PAGE分析純化的RBD蛋白
    3.4 RBD蛋白免疫印跡
    3.5 RBD蛋白定量
    3.6 假病毒制備所用質粒瓊脂糖電泳
    3.7 功能性假病毒的滴度測定
    3.8 SARS-CoV,S蛋白和N蛋白IgG動態(tài)變化
    3.9 抗體的中和活性及與SARS-CoV、S蛋白IgG相關性
    3.10 RBD IgG抗體動態(tài)變化以及與中和活性的相關性
    3.11 4名康復者第五年IgG抗體和抗體的中和活性檢測
4 討論
    4.1 SARS-CoV及其結構蛋白抗體動態(tài)變化
        4.1.1 S蛋白、N蛋白特異抗體動態(tài)變化
        4.1.2 S蛋白間接ELISA的靈敏度高于商品化試劑盒
        4.1.3 SARS康復者抗體的中和活性
        4.1.4 S蛋白特異IgG抗體與中和活性相關性
        4.1.5 RBD蛋白特異IgG抗體與中和活性相關性
    4.2 抗體長期存在機制與意義
        4.2.1 抗體長期存在的機制
        4.2.2 抗體長期存在的意義
5 小結
6 參考文獻
綜述 SARS研究概述
    綜述參考文獻
文章發(fā)表
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3435113