目的:觀察甲狀腺素對(duì)氣道上皮細(xì)胞黏蛋白（mucin,MUC）5AC表達(dá)的影響及其調(diào)控機(jī)制。方法:1、MUC5AC在A549細(xì)胞中的表達(dá):體外培養(yǎng)A549細(xì)胞,以不同濃度的甲狀腺素刺激A549細(xì)胞24h后,用ELISA法檢測(cè)上清液中MUC5AC蛋白含量,用RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞中MUC5ACmRNA水平。2、設(shè)計(jì)、構(gòu)建MUC5AC基因5’上游序列的表達(dá)質(zhì)粒:根據(jù)MUC5AC基因5’調(diào)控區(qū)的DNA序列、表達(dá)載體pGL3質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)需要設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增引物,以人基因組總DNA為模板擴(kuò)增MUC5AC基因5’非編碼區(qū)片段,雙酶切后插入pGL3質(zhì)粒構(gòu)成重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切和DNA測(cè)序鑒定證實(shí)構(gòu)建成功后,用脂質(zhì)體將表達(dá)質(zhì)粒和內(nèi)參照質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞,培養(yǎng)24h后,加入甲狀腺素（濃度為6.5ng/ml）處理,繼續(xù)孵育24h收集細(xì)胞,采用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定報(bào)告基因的表達(dá)水平。結(jié)果:1、用ELISA法檢測(cè)A549細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MUC5AC蛋白的表達(dá)顯示,甲狀腺素可成濃度、時(shí)間依賴性地使A549細(xì)胞MUC5AC蛋白表達(dá)水平下降,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用RT-PCR法檢測(cè)M... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

總RNA電泳圖

3781etteeeegeegteeaeaeaatgagtgttggeeggaggaagetggeeetgetetgggeeet 3841ggetetegetetggeetgeaeeeggeataeaggtaeggettggeeetgggeeet……//圖2一IMUCSAC基因5’調(diào)控區(qū)的DNA序列FigZ一15， flankingregionofthehumanMUCSACmueingene泊尸一一AmPr\S)’nth創(chuàng)吸 Pclf..:A)引g”鉀才If刁ns〔「IL，U，〕031〔a劃卜刁5幾刁︸卜11巧陽(yáng)架伽洲鍘訓(xùn)洲盼b自 ckgroundroductlon)/曰扮竺腸︷瀏、_了 d11!丫一叔以l︸卜.pGL3王n加aOC.rV.‘tor(5腸二bp)刀鄒5日門”即’日甲幻卜l’l;亡辛\、〔獷13弓屯丫j幻卜丫、，、。日湘詞少狡，!:.擔(dān)、廠，r，幻日.1火J了\廠品‘”’1功三11

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文Z000bP一圖2一4基因組DNA電泳圖M:分子量標(biāo)準(zhǔn);1一2:基因組DNA電泳結(jié)果FigZ一 4AgarosegeleleetroPhoresisofgenomeDNAM:DL一 2000DNAladder:Lanesl一 2:eleetroPhoresisresultofgenomeDNA2.2熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3一Ehancer質(zhì)粒酶切鑒定熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3一Ehancer質(zhì)粒經(jīng)KPnl酶切后，瓊脂糖凝膠電泳顯示單一條帶，約為so64bp，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。圖2一5質(zhì)粒pGL3一 EnhancerKpnl單酶切電泳圖M:分子量標(biāo)準(zhǔn)卜2:質(zhì)拉pGL3一Enh:ncer單酶切后 F192一 5AnalysisofPlasmidPGL3一EnhancerdigestedwithKPnIrestrietionenzyme LaneM:IkbDNAmarker:lanesl&2:resultofPGL3一EnhaneerdigestedbyKPnl36

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]慢性阻塞性肺疾病患者氣道粘蛋白分子表型的研究[J]. 周向東,童瑾,蘭箭.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2002(07)
[2]慢性阻塞性肺病患者免疫功能的研究[J]. 黃奕江,馮夏,鄭萬川.  臨床內(nèi)科雜志. 1997(01)



本文編號(hào)：3420509