目的:觀察甲狀腺素對氣道上皮細胞黏蛋白（mucin,MUC）5AC表達的影響及其調控機制。方法:1、MUC5AC在A549細胞中的表達:體外培養(yǎng)A549細胞,以不同濃度的甲狀腺素刺激A549細胞24h后,用ELISA法檢測上清液中MUC5AC蛋白含量,用RT-PCR法檢測細胞中MUC5ACmRNA水平。2、設計、構建MUC5AC基因5’上游序列的表達質粒:根據(jù)MUC5AC基因5’調控區(qū)的DNA序列、表達載體pGL3質粒的結構特點及實驗需要設計PCR擴增引物,以人基因組總DNA為模板擴增MUC5AC基因5’非編碼區(qū)片段,雙酶切后插入pGL3質粒構成重組質粒。重組質粒經(jīng)酶切和DNA測序鑒定證實構建成功后,用脂質體將表達質粒和內參照質粒共轉染A549細胞,培養(yǎng)24h后,加入甲狀腺素（濃度為6.5ng/ml）處理,繼續(xù)孵育24h收集細胞,采用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)測定報告基因的表達水平。結果:1、用ELISA法檢測A549細胞培養(yǎng)上清液中MUC5AC蛋白的表達顯示,甲狀腺素可成濃度、時間依賴性地使A549細胞MUC5AC蛋白表達水平下降,與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義。用RT-PCR法檢測M... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

總RNA電泳圖

3781etteeeegeegteeaeaeaatgagtgttggeeggaggaagetggeeetgetetgggeeet 3841ggetetegetetggeetgeaeeeggeataeaggtaeggettggeeetgggeeet……//圖2一IMUCSAC基因5’調控區(qū)的DNA序列FigZ一15， flankingregionofthehumanMUCSACmueingene泊尸一一AmPr\S)’nth創(chuàng)吸 Pclf..:A)引g”鉀才If刁ns〔「IL，U，〕031〔a劃卜刁5幾刁︸卜11巧陽架伽洲鍘訓洲盼b自 ckgroundroductlon)/曰扮竺腸︷瀏、_了 d11!丫一叔以l︸卜.pGL3王n加aOC.rV.‘tor(5腸二bp)刀鄒5日門”即’日甲幻卜l’l;亡辛\、〔獷13弓屯丫j幻卜丫、，、。日湘詞少狡，!:.擔、廠，r，幻日.1火J了\廠品‘”’1功三11

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文Z000bP一圖2一4基因組DNA電泳圖M:分子量標準;1一2:基因組DNA電泳結果FigZ一 4AgarosegeleleetroPhoresisofgenomeDNAM:DL一 2000DNAladder:Lanesl一 2:eleetroPhoresisresultofgenomeDNA2.2熒光素酶報告基因載體pGL3一Ehancer質粒酶切鑒定熒光素酶報告基因載體pGL3一Ehancer質粒經(jīng)KPnl酶切后，瓊脂糖凝膠電泳顯示單一條帶，約為so64bp，與文獻報道一致。圖2一5質粒pGL3一 EnhancerKpnl單酶切電泳圖M:分子量標準卜2:質拉pGL3一Enh:ncer單酶切后 F192一 5AnalysisofPlasmidPGL3一EnhancerdigestedwithKPnIrestrietionenzyme LaneM:IkbDNAmarker:lanesl&2:resultofPGL3一EnhaneerdigestedbyKPnl36

【參考文獻】：
期刊論文
[1]慢性阻塞性肺疾病患者氣道粘蛋白分子表型的研究[J]. 周向東,童瑾,蘭箭.  中華結核和呼吸雜志. 2002(07)
[2]慢性阻塞性肺病患者免疫功能的研究[J]. 黃奕江,馮夏,鄭萬川.  臨床內科雜志. 1997(01)



本文編號：3420509