吸煙是困擾全世界人民健康的問題,每年因吸煙死亡的人數(shù)達到700萬,而且還在不斷增長,緩解吸煙引起的損傷成為值得研究的課題。泛素特異性蛋白酶7（USP7）是目前USPs家族中被研究地最多的成員之一。已知USP7參與的功能包括:細胞周期調(diào)節(jié)、免疫應激、信號通路、癌癥靶標和DNA損傷等。為了研究USP7在吸煙引起的肺細胞和組織損傷中產(chǎn)生的影響,我們建立了Usp7高表達的肺癌細胞株、小鼠胚胎成纖維細胞株以及Usp7特異性敲入的小鼠模型。通過用煙霧提取液CSE處理細胞的方式建立吸煙導致的肺細胞損傷模型,給小鼠吸煙30d的方式建立小鼠吸煙模型。后續(xù)通過western blot、免疫熒光、β-gal等實驗檢測損傷相關(guān)指標的變化。我們的結(jié)果發(fā)現(xiàn)吸煙導致端粒DNA損傷,而USP7能起到緩解作用。免疫熒光和β-gal實驗顯示吸煙導致細胞增殖停滯、衰老程度加深,Usp7高表達能起到保護作用。小鼠的呼吸功能檢測顯示,Usp7特異性敲入小鼠能緩解吸煙引起的呼吸功能減弱。肺組織切片的HE染色、Masson染色、羥脯氨酸含量測定、炎癥因子MCP1的ELISA實驗結(jié)果,表明吸煙引起的肺纖維化能在Usp7特異性敲入的小... 

【文章來源】：杭州師范大學浙江省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Usp7基因在人不同組織中的表達量（引自GeneCard）

圖 1.2 Usp7 基因在小鼠不同組織中的表達量（引自 Gene Card）USP7 蛋白包含四個結(jié)構(gòu)域：一個 N-氨基末端的 TRAF 區(qū)域，一個酶催化活性中心（aa208-560）和兩個 C-羧基末端結(jié)構(gòu)域[16]，其中 TRAF 區(qū)域和 64kDa 的C-羧基末端區(qū)域是 USP7 與上下游蛋白結(jié)合的重要部位。TRAF 區(qū)域負責直接與底物蛋白相結(jié)合，比如 P53、MDM2、MDMX、EBNA1 蛋白等[17][18]（圖 1.3）。酶催化活性中心包含兩個高度保守區(qū)域：組氨酸盒和半胱氨酸盒[19]。C 端區(qū)域含有 2 個泛素連接酶和 5 個 UBL，2 個泛素連接酶能與泛素相互作用[20]，5 個 UBL中的 UBL-4/5 是直接活化 USP7 酶活性的關(guān)鍵區(qū)域，而 UBL-1、UBL-2 和 UBL-3對 USP7 的活化起到間接作用，是通過與 GMP 合成酶結(jié)合引起一系列反應的[21]。另一個 C-末端的結(jié)構(gòu)域可與 MDM2 相互作用[22]。

圖 1.2 Usp7 基因在小鼠不同組織中的表達量（引自 Gene Card）SP7 蛋白包含四個結(jié)構(gòu)域：一個 N-氨基末端的 TRAF 區(qū)域，一個酶催化（aa208-560）和兩個 C-羧基末端結(jié)構(gòu)域[16]，其中 TRAF 區(qū)域和 64kDa末端區(qū)域是 USP7 與上下游蛋白結(jié)合的重要部位。TRAF 區(qū)域負責直接白相結(jié)合，比如 P53、MDM2、MDMX、EBNA1 蛋白等[17][18]（圖 1.3活性中心包含兩個高度保守區(qū)域：組氨酸盒和半胱氨酸盒[19]。C 端區(qū)域泛素連接酶和 5 個 UBL，2 個泛素連接酶能與泛素相互作用[20]，5 個 UBL-4/5 是直接活化 USP7 酶活性的關(guān)鍵區(qū)域，而 UBL-1、UBL-2 和 UBL7 的活化起到間接作用，是通過與 GMP 合成酶結(jié)合引起一系列反應的[2 C-末端的結(jié)構(gòu)域可與 MDM2 相互作用[22]。


本文編號：3416931