本文關(guān)鍵詞：多西環(huán)素對(duì)哮喘大鼠VEGF、MMP-9的作用及血管重塑的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究多西環(huán)素對(duì)哮喘大鼠VEGF、MMP-9表達(dá)的影響。成功建立哮喘大鼠模型，檢測(cè)肺組織及血清中VEGF和MMP-9水平，并結(jié)合氣道壁厚度及血管密度反映血管重塑、氣道重塑；通過對(duì)比多西環(huán)素干預(yù)后VEGF、MMP-9水平及氣道壁厚度、血管密度的變化，探討多西環(huán)素對(duì)哮喘氣道重塑、血管重塑的作用。 方法：將33只清潔級(jí)SD大鼠（雄性，6周齡，體重50-100g之間）隨機(jī)分成正常對(duì)照組、哮喘模型組和多西環(huán)素干預(yù)組，每組11只。其中哮喘模型組方法制備，分別于實(shí)驗(yàn)第1、8天對(duì)大鼠腹腔注射OVA100mg和氫氧化鋁100mg（混于生理鹽水2mL中）進(jìn)行致敏，第15天起將大鼠置于自制的非完全密閉霧化吸入箱內(nèi)，給予OVA溶液霧化吸入，隔日1次，每次30min，共激發(fā)20次，根據(jù)大鼠表現(xiàn)調(diào)整其濃度。當(dāng)大鼠出現(xiàn)煩躁、嗆咳、呼吸急促、活動(dòng)量下降等典型的哮喘發(fā)作的表現(xiàn)時(shí)為激發(fā)成功。而多西環(huán)素組則在每次OVA霧化吸入前30min按30mg/kg經(jīng)口腔灌服方式給予小鼠多西環(huán)素，正常對(duì)照組以生理鹽水代替OVA；以上兩組致敏和激發(fā)方法與哮喘組相同。在最后一次激發(fā)24小時(shí)后，，將大鼠以1%戊巴比妥鈉麻醉，取材。收集支氣管肺泡灌洗液，計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞；部分肺組織行病理切片，HE染色；免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組大鼠肺組織中VEGF和MMP-9的表達(dá)變化，并應(yīng)用圖像分析軟件技術(shù)測(cè)量VEGF和MMP-9的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度；ELISA法檢測(cè)血清中的VEGF的含量；應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)測(cè)定氣道壁厚度及血管密度。 結(jié)果： 1支氣管肺泡灌洗液（BALF）中細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞分類的變化：細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞結(jié)果（×106/L）：正常對(duì)照組分別為9.42±3.67、1.24±0.72，哮喘組分別為35.53±7.06、4.84±0.65，多西環(huán)素組分別為14.66±5.81、2.14±0.58。三組中哮喘組的細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞均高于其他兩組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；而多西環(huán)素組亦高于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=64.840，P＜0.05；F=90.598，P＜0.01）。 2病理結(jié)果：哮喘組大鼠肺組織病理切片可見支氣管黏膜增厚、氣道平滑肌明顯增厚、血管增生、血管壁增厚，且支氣管黏膜下及肺泡間質(zhì)等處可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。多西環(huán)素組的支氣管壁增厚程度、血管增生及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等均較哮喘組減輕。正常對(duì)照組的大鼠肺組織病理切片可見支氣管管腔規(guī)則，支氣管黏膜上皮、黏膜肌層、肺組織結(jié)構(gòu)完整，偶可見炎性細(xì)胞。 3圖像分析結(jié)果：哮喘組大鼠的氣道壁厚度（μm~2/μm）與血管密度（個(gè)/mm~2）（109.95±13.85；155.55±14.31）均高于多西環(huán)素組（86.37±5.85；116.64±7.33），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；兩組又均高于對(duì)照組（65.47±7.22；95.45±7.19），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=58.737，P＜0.01；F=98.885，P＜0.01）。 4免疫組化法結(jié)果：哮喘組大鼠肺組織中MMP-9及VEGF的平均光密度值（0.52±0.06、0.45±0.04）高于多西環(huán)素組（0.39±0.06、0.27±0.06），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組均高于對(duì)照組（0.24±0.06、0.21±0.04），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=57.966，P＜0.01；F=75.261，P＜0.01）。 5ELISA法測(cè)定血清中VEGF的含量（pg/ml）：哮喘組大鼠血清中的VEGF含量（202.86±16.90）高于多西環(huán)素組（169.94±16.65），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），兩組均高于對(duì)照組（137.75±17.02），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=41.043，P＜0.01）。 6相關(guān)性分析結(jié)果：血管密度與氣道壁厚度呈顯著正相關(guān)（r=0.891，P＜0.01），與肺組織中MMP-9、VEGF的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)（r=0.793，P＜0.01；r=0.889，P＜0.01），與血清中VEGF水平呈顯著正相關(guān)（r=0.855，P＜0.01）；肺組織中MMP-9與VEGF的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)（r=0.796，P＜0.01）。 結(jié)論： 1哮喘組大鼠氣道中存在明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，提示哮喘是由多種炎性細(xì)胞參與的氣道炎癥，而多西環(huán)素可明顯減輕氣道炎癥。 2多西環(huán)素可明顯減輕哮喘大鼠肺組織中的腺體增生、氣道壁增厚、血管增生等病理改變，亦可明顯降低氣道壁厚度及血管密度，且氣道壁厚度與血管密度呈顯著正相關(guān)，說明新生血管形成在氣道重塑過程中起著重要作用，是其中的重要方面，而多西環(huán)素可明顯減輕氣道重塑、血管重塑。 3哮喘大鼠MMP-9及VEGF的表達(dá)水平明顯升高，而多西環(huán)素可使二者表達(dá)水平明顯降低，且MMP-9與VEGF表達(dá)水平呈正相關(guān)，證實(shí)在哮喘的發(fā)病過程中，VEGF、MMP-9發(fā)揮著重要作用，且二者之間存在協(xié)同調(diào)節(jié)關(guān)系；而多西環(huán)素可抑制MMP-9的活性和表達(dá)，并可導(dǎo)致VEGF表達(dá)的下調(diào)。 4相關(guān)分析結(jié)果顯示大鼠MMP-9、VEGF表達(dá)水平與血管密度呈正相關(guān)，證實(shí)MMP-9、VEGF對(duì)哮喘血管重塑有重要作用，可共同促進(jìn)新生血管形成，參與哮喘氣道重塑、血管重塑；多西環(huán)素減輕哮喘血管重塑，即可能是通過降低二者表達(dá)水平，而達(dá)到減輕氣道炎癥及血管重塑、氣道重塑作用的。
【關(guān)鍵詞】：哮喘 血管重塑 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 基質(zhì)金屬蛋白酶-9 多西環(huán)素
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R562.25
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-17
• 結(jié)果17-19
• 附圖19-29
• 附表29-31
• 討論31-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 綜述 VEGF 和 MMP-9 與支氣管哮喘血管重塑的關(guān)系41-51
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 致謝51-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷52

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：多西環(huán)素對(duì)哮喘大鼠VEGF、MMP-9的作用及血管重塑的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：339505