目的:初步研究E3泛素連接酶NEDD4L（neural precursor cell expressed developmentally downregulated gene 4-like）對(duì)小鼠樹突狀細(xì)胞（dendritic cells,DCs）亞群和功能以及DCs誘導(dǎo)的Th1/Th2分化的影響,進(jìn)而揭示NEDD4L分子在樹突狀細(xì)胞和過敏性肺炎中的作用。方法:1.采用Cre-Loxp重組酶系統(tǒng),建立DCs特異性敲除NEDD4L小鼠模型。將NEDD4L^f/f小鼠（C57BL/6背景）與CD11c-Cre^+/-小鼠（C57BL/6背景）進(jìn)行雜交繁育,運(yùn)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)鑒定其子代小鼠基因型,篩選出DCs特異性敲除NEDD4L的小鼠(KO,CD11c-Cre^+/-NEDD4L^f/f)和同窩野生型對(duì)照小鼠(WT,CD11c-Cre^-/-NEDD4L^f/f)。2.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)WT和KO型小鼠脾臟中DCs和cDCs亞群比例變化以及CD11c

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

NEDD4家族E3泛素連接酶結(jié)構(gòu)圖

圖4.1 DCs特異性敲除NEDD4L小鼠模型的建立和鑒定結(jié)果（A）小鼠繁育模式圖 （B）CD11c-Cre及NEDD4L Loxp基因型鑒定結(jié)果（C）BMDCs中NEDD4L表達(dá)水平Figure 4.1 The establishment and identification of mouse model of NEDD4L specific knockoutin DCs. （A）The pattern diagram of mouse breeding （B）The genotype identification of CD11c-creand NEDD4L loxp （C）The expression of NEDD4L in BMDCs.4.2 DCs 中缺失 NEDD4L 不影響脾臟 DCs 群體、外周 CD4+T 與 CD8+T細(xì)胞的比例以及 DCs 表面膜分子表達(dá)脾和黏膜相關(guān)淋巴組織是人體重要的外周免疫器官和組織，而DCs是機(jī)體中功能

圖 4.3 DCs 中缺失 NEDD4L 對(duì)炎癥因子分泌的影響（A）BMDCs 中炎癥因子 mRNA 水平 （B）BMDCs 培養(yǎng)上清中 IL-4 蛋白水平Figure 4.3 The effects of deletion of NEDD4L in DCs on secretion of inflammatory cytokines（A）The mRNAtranscription levels of inflammatory cytokines in BMDCs （B）The IL-4 protein levein culture supernatant of BMDCs. The representative data are one of three independent assays. Data armean ±SEM. NS，no significant difference，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.4.4 DCs 中缺失 NEDD4L 不影響 BMDCs 激活的抗原特異性 CD4+T 細(xì)胞增殖，但促其向 Th2 分化4.4.1 BMDCs 與 OT-II 小鼠 CD4+T 細(xì)胞共培養(yǎng)DCs 的主要功能是攝取、加工處理和呈遞抗原。當(dāng) DCs 遇到外源性抗原時(shí)，DC


本文編號(hào)：3390837