發(fā)布時間：2021-09-07 09:26

　　半乳糖凝集素-1（Gal-1）表達(dá)于細(xì)胞胞質(zhì)、細(xì)胞核、細(xì)胞內(nèi)膜和外膜及細(xì)胞外基質(zhì)。通過影響免疫細(xì)胞粘附、遷移、激活、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、增生、分化和凋亡調(diào)節(jié)炎癥過程。本研究中,我們主要針對于Gal-1在體外和體內(nèi)對炎癥反應(yīng)的影響及其機(jī)制。1.Gal-1在金葡菌感染的巨噬細(xì)胞NF-κB炎癥中的作用研究背景Gal-1在調(diào)節(jié)細(xì)胞炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。目前研究發(fā)現(xiàn)在克氏錐蟲感染巨噬細(xì)胞炎癥模型中Gal-1發(fā)揮抗炎作用,但Gal-1在金黃色葡萄球菌（金葡菌）感染巨噬細(xì)胞NF-κB炎癥中的抗炎作用尚未被證實(shí)。研究目的1.研究金葡菌感染巨噬細(xì)胞對Gal-1和NF-κB活化的影響2.探討Gal-1在金葡菌介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞NF-κB炎癥活化中的作用研究方法1.金葡菌感染巨噬細(xì)胞活化Gal-1和NF-κB的檢測金葡菌感染小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7 20 min、40 min、60 min、120 min。Western Blotting（WB）檢測相關(guān)信號蛋白表達(dá)水平,激光共聚焦顯微鏡（LSCM）觀察GFP-p-P65表達(dá)水平。2.r Gal-1預(yù)處理金葡菌感染巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)的NF-κB炎癥的檢測重組Gal-1（... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

金黃色葡萄球菌感染RAW264.7細(xì)胞顯著增加了Gal-1、p-ERK和p-P65的表

安徽醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文403.4rGal-1通過ERK通路降低了金葡菌感染巨噬細(xì)胞激活的NF-κB炎癥同時給予ERK特異性抑制劑（U0126）和rGal-1預(yù)處理金葡菌感染的RAW264.7細(xì)胞后，我們采用WesternBlotting檢測p-ERK和p-P65表達(dá)水平。如圖4A和4B所示，與僅給予rGal-1處理相比，同時給予U0126和rGal-1處理金葡菌感染的RAW264.7細(xì)胞顯著增加了p-P65表達(dá)水平。進(jìn)一步地，我們采用ELISA方法檢測上清液中IL-1β和TNF-α分泌水平。如圖4C所示，與僅給予rGal-1處理相比，同時給予U0126和rGal-1處理金葡菌感染的RAW264.7細(xì)胞顯著增加了細(xì)胞上清液中IL-1β和TNF-α分泌水平。這些結(jié)果表明，在金葡菌感染的巨噬細(xì)胞炎癥模型中，外源性Gal-1能夠通過ERK通路來抑制NF-κB炎癥。圖4rGal-1通過ERK通路降低了金葡菌感染巨噬細(xì)胞激活的NF-κB炎癥。（A）圖顯示0.4μg/mlrGal-1或30nMU0126預(yù)處理RAW264.7細(xì)胞24h后，金黃色葡萄球菌感染RAW264.7細(xì)胞（感染指數(shù)：10）60min。WesternBlotting檢測細(xì)胞內(nèi)p-ERK和p-P65的表達(dá)水平。（B）圖顯示了條帶灰度強(qiáng)度的定量分析結(jié)果。

安徽醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文55圖1建立小鼠急性過敏性氣道炎癥的模型圖Fig.1Establishmentofmousemodelofacuteallergicairwayinflammation.2.2.3標(biāo)本收集建立模型的第18d，1%戊巴比妥鈉溶液（50μg/g）腹腔注射麻醉起效后，摘眼球法取血。血標(biāo)本收集在無菌EP管中，短時間內(nèi)立即檢測血漿中IL-17水平和anti-OVAIgE水平。將取血后的小鼠仰臥固定于固定器上（放置冰上），充分暴露胸腔，快速鈍性解剖小鼠頸部充分暴露氣管，將氣管注射針頭置入氣管內(nèi)，右主支氣管結(jié)扎，左肺PBS灌洗（0.5ml×3次），收集支氣管肺泡灌洗液（BALF），700rpm4℃離心5min，將上清吸入至新的EP管中，后-80℃保存，待BALF中檢測IL-4、IL-5和Galectin-1水平。離心后細(xì)胞用200μlPBS重懸，瑞氏吉姆薩染色顯微鏡下行細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。隨后快速分離小鼠右肺，部分肺組織置于液氮快速冷凍后置于-80℃保存，待提取蛋白行免疫蛋白印跡（WesternBloting）檢測和提取總RNA進(jìn)行QPCR檢測；剩余肺組織置于4%多聚甲醛溶液內(nèi)固定，待之后行組織病理學(xué)檢測。2.2.3細(xì)胞分類計(jì)數(shù)2.2.3.1白細(xì)胞計(jì)數(shù)（1）在收取各組小鼠BALF后，反復(fù)擦拭蓋玻片和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板以確保干凈，然后在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上蓋上蓋玻片。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]新版中國支氣管哮喘防治指南與全球支氣管哮喘防治創(chuàng)議的異同[J]. 沈華浩,杜旭菲,應(yīng)頌敏.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2018 (03)



本文編號：3389298