目的:探討流感病毒（influenza A virus,IAV）激活TLR7/NF-κB信號通路調(diào)控COPD急性加重氣道炎癥反應(yīng)的分子機制,為臨床尋找治療IAV感染誘導(dǎo)AECOPD提供新靶點和理論依據(jù)。方法:從手術(shù)標本中獲取正常和COPD患者氣管組織,進行分離、純化、鑒定、培養(yǎng)人原代氣道上皮細胞（Normal/Disease Human bronchial epithelial cells,NHBE/DHBE）。實驗分為6組,正常氣道上皮細胞組（NHBE組/A組）、正常氣道上皮細胞+A型流感病毒（IAV）組（NHBE+IAV/B組組）、COPD氣道上皮細胞組（COPD/C組）、COPD氣道上皮細胞+IAV組（COPD+IAV/D組）、正常氣道上皮細胞+TLR7小干擾RNA組（NHBE+TLR7 si RNA/E組）、COPD氣道上皮細胞+TLR7小干擾RNA組（COPD+TLR7 si RNA/F組）,分別與IAV、TLR7小干擾RNA共培養(yǎng)24h后,免疫印跡（Western blot）法檢測氣道上皮細胞TLR7、NF-κB蛋白表,酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測細胞上清液中白細胞介（... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

人氣道上皮細胞形態(tài)特征及鑒定免疫熒光×2001A氣道上皮細胞培養(yǎng)第4天時呈片狀生長1B氣道上皮細胞培養(yǎng)第7天時呈“鋪路石”樣生長1C氣道上皮細胞培養(yǎng)第10天時細胞間排列緊密1D氣道上皮細胞胞膜呈綠

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文圖2.IAV感染對氣道上皮細胞中TLR7、NF-κB蛋白表達及細胞上清液中IL-6、TNF-α表達的影響（1：NHBE（正常氣道上皮細胞）組；2：NHBE+IAV（正常氣道上皮細胞+A型流感病毒）組；3：DHBE（慢阻肺氣道上皮細胞）組；4：DHBE+IAV（慢阻肺氣道上皮細胞+A型流感病毒）組；實驗在96孔板進行，重復(fù)6次；a：NHBE+IAV組、DHBE組、DHBE+IAV組與NHBE組比P<0.01；DHBE+IAV組與DHBE組比P<0.01）。5.3TLR7siRNA下調(diào)氣道上皮細胞中TLR7和NF-κB蛋白的表達比較NHBE組、NHBE+TLR7siRNA組、DHBE組、DHBE+TLR7siRNA組中TLR7、NF-κB蛋白表達水平的差異，四組間比較具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與NHBE組相比，NHBE+TLR7siRNA組的TLR7、NF-κB蛋白表達顯著下降(P<0.01)；與DHBE組相比，DHBE+TLR7siRNA組中TLR7、NF-κB蛋白表達水平顯著下降(P<0.01)(3A-C)。采用ELISA法檢測各組細胞培養(yǎng)上清液中IL-6、TNF-α的表達，趨勢和WB檢測TLR7、NF-κB的蛋白表達一致(3E，3F)。24

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文圖3.TLR7siRNA對氣道上皮細胞中TLR7、NF-κB蛋白表達及細胞上清液中IL-6、TNF-α表達的影響（1：NHBE（正常氣道上皮細胞）組；2：NHBE+TLR7siRNA（正常氣道上皮細胞+TLR7小干擾RNA）組；3：DHBE（慢阻肺氣道上皮細胞）組；4：DHBE+TLR7siRNA（慢阻肺氣道上皮細胞+TLR7小干擾RNA）組；實驗在96孔板進行，重復(fù)6次；a：NHBE+TLR7siRNA組與NHBE組比P<0.05；b：DHBE+TLR7siRNA組與DHBE組比P<0.05）。6討論COPD屬于慢性氣道炎癥性疾病，由于長期有毒氣體和有害微粒的暴露導(dǎo)致氣道的防御功能的減退和免疫功能的低下，對呼吸道病毒感染具有明顯的易感性。由于國內(nèi)流感病毒疫苗接種率普遍較低，臨床上流感病毒感染已成為AECOPD最常見最早的誘發(fā)因子[6,26]，病毒感染可導(dǎo)致COPD患者病情急性急劇加重，臨床癥狀惡化，肺功能進行性下降，甚至呼吸衰竭，死亡率升高[27]，同時，AECOPD還可以導(dǎo)致其他重要臟器功能的損害，心力衰竭發(fā)生幾率提高5%、病毒性腦膜炎發(fā)生幾率提高4倍[28]，臨床預(yù)后更差。但是，關(guān)于流感病毒誘發(fā)COPD急性加重25

【參考文獻】：
期刊論文
[1]血清降鈣素原、超敏C反應(yīng)蛋白及D-二聚體聯(lián)合檢測在慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者預(yù)后預(yù)測中的價值[J]. 周正華,溫保江,龔聲宏,梁志勇.  結(jié)核病與肺部健康雜志. 2019(04)
[2]肺表面活性蛋白D、降鈣素原及C-反應(yīng)蛋白在慢性阻塞性肺疾病臨床應(yīng)用中的價值探討[J]. 李蓓,徐冬梅.  中國衛(wèi)生檢驗雜志. 2019(23)
[3]C反應(yīng)蛋白與白介素6聯(lián)合血常規(guī)檢驗在COPD患者中的治療效果觀察[J]. 劉鴻飛,侯文權(quán).  當代醫(yī)學. 2019(34)
[4]血清炎性標志物在慢阻肺的應(yīng)用分析[J]. 劉晨陽.  中國老年保健醫(yī)學. 2019(03)
[5]固本養(yǎng)臟湯治療COPD急性加重期療效及對血CRP、TNF-α、IL-8的影響[J]. 鐘小艷,靳娟娟.  現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2019(12)
[6]IL-10與慢性阻塞性肺疾病嚴重程度的關(guān)系[J]. 阮國虎,李歡.  臨床肺科雜志. 2019(04)
[7]白細胞介素-8和-32在老年慢性阻塞性肺疾病急性加重期中的水平及意義[J]. 汪建英,方強.  中國老年學雜志. 2019(04)
[8]慢性阻塞性肺疾病急性加重期呼吸道病毒感染檢出率及危險因素分析[J]. 劉麗,張春燕,邱鏃文.  臨床肺科雜志. 2018(06)
[9]不同病原體致COPD患者急性加重期血清炎癥標志物改變及對患者臨床轉(zhuǎn)歸的影響[J]. 鐘國澤.  中國微生態(tài)學雜志. 2018(04)
[10]慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者血清高遷移率蛋白1、表面活性蛋白D、腫瘤壞死因子-α的表達及意義[J]. 凌杰兵,傅一牧,馬斌.  中國臨床醫(yī)生雜志. 2018(03)



本文編號：3369413