目的:探討流感病毒（influenza A virus,IAV）激活TLR7/NF-κB信號通路調(diào)控COPD急性加重氣道炎癥反應(yīng)的分子機(jī)制,為臨床尋找治療IAV感染誘導(dǎo)AECOPD提供新靶點(diǎn)和理論依據(jù)。方法:從手術(shù)標(biāo)本中獲取正常和COPD患者氣管組織,進(jìn)行分離、純化、鑒定、培養(yǎng)人原代氣道上皮細(xì)胞（Normal/Disease Human bronchial epithelial cells,NHBE/DHBE）。實(shí)驗(yàn)分為6組,正常氣道上皮細(xì)胞組（NHBE組/A組）、正常氣道上皮細(xì)胞+A型流感病毒（IAV）組（NHBE+IAV/B組組）、COPD氣道上皮細(xì)胞組（COPD/C組）、COPD氣道上皮細(xì)胞+IAV組（COPD+IAV/D組）、正常氣道上皮細(xì)胞+TLR7小干擾RNA組（NHBE+TLR7 si RNA/E組）、COPD氣道上皮細(xì)胞+TLR7小干擾RNA組（COPD+TLR7 si RNA/F組）,分別與IAV、TLR7小干擾RNA共培養(yǎng)24h后,免疫印跡（Western blot）法檢測氣道上皮細(xì)胞TLR7、NF-κB蛋白表,酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測細(xì)胞上清液中白細(xì)胞介（... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

人氣道上皮細(xì)胞形態(tài)特征及鑒定免疫熒光×2001A氣道上皮細(xì)胞培養(yǎng)第4天時呈片狀生長1B氣道上皮細(xì)胞培養(yǎng)第7天時呈“鋪路石”樣生長1C氣道上皮細(xì)胞培養(yǎng)第10天時細(xì)胞間排列緊密1D氣道上皮細(xì)胞胞膜呈綠

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文圖2.IAV感染對氣道上皮細(xì)胞中TLR7、NF-κB蛋白表達(dá)及細(xì)胞上清液中IL-6、TNF-α表達(dá)的影響（1：NHBE（正常氣道上皮細(xì)胞）組；2：NHBE+IAV（正常氣道上皮細(xì)胞+A型流感病毒）組；3：DHBE（慢阻肺氣道上皮細(xì)胞）組；4：DHBE+IAV（慢阻肺氣道上皮細(xì)胞+A型流感病毒）組；實(shí)驗(yàn)在96孔板進(jìn)行，重復(fù)6次；a：NHBE+IAV組、DHBE組、DHBE+IAV組與NHBE組比P<0.01；DHBE+IAV組與DHBE組比P<0.01）。5.3TLR7siRNA下調(diào)氣道上皮細(xì)胞中TLR7和NF-κB蛋白的表達(dá)比較NHBE組、NHBE+TLR7siRNA組、DHBE組、DHBE+TLR7siRNA組中TLR7、NF-κB蛋白表達(dá)水平的差異，四組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與NHBE組相比，NHBE+TLR7siRNA組的TLR7、NF-κB蛋白表達(dá)顯著下降(P<0.01)；與DHBE組相比，DHBE+TLR7siRNA組中TLR7、NF-κB蛋白表達(dá)水平顯著下降(P<0.01)(3A-C)。采用ELISA法檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-6、TNF-α的表達(dá)，趨勢和WB檢測TLR7、NF-κB的蛋白表達(dá)一致(3E，3F)。24

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文圖3.TLR7siRNA對氣道上皮細(xì)胞中TLR7、NF-κB蛋白表達(dá)及細(xì)胞上清液中IL-6、TNF-α表達(dá)的影響（1：NHBE（正常氣道上皮細(xì)胞）組；2：NHBE+TLR7siRNA（正常氣道上皮細(xì)胞+TLR7小干擾RNA）組；3：DHBE（慢阻肺氣道上皮細(xì)胞）組；4：DHBE+TLR7siRNA（慢阻肺氣道上皮細(xì)胞+TLR7小干擾RNA）組；實(shí)驗(yàn)在96孔板進(jìn)行，重復(fù)6次；a：NHBE+TLR7siRNA組與NHBE組比P<0.05；b：DHBE+TLR7siRNA組與DHBE組比P<0.05）。6討論COPD屬于慢性氣道炎癥性疾病，由于長期有毒氣體和有害微粒的暴露導(dǎo)致氣道的防御功能的減退和免疫功能的低下，對呼吸道病毒感染具有明顯的易感性。由于國內(nèi)流感病毒疫苗接種率普遍較低，臨床上流感病毒感染已成為AECOPD最常見最早的誘發(fā)因子[6,26]，病毒感染可導(dǎo)致COPD患者病情急性急劇加重，臨床癥狀惡化，肺功能進(jìn)行性下降，甚至呼吸衰竭，死亡率升高[27]，同時，AECOPD還可以導(dǎo)致其他重要臟器功能的損害，心力衰竭發(fā)生幾率提高5%、病毒性腦膜炎發(fā)生幾率提高4倍[28]，臨床預(yù)后更差。但是，關(guān)于流感病毒誘發(fā)COPD急性加重25

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3369413