RNA干擾沉默肺泡巨噬細(xì)胞MD-2對(duì)脂多糖所致大鼠急性肺損傷的影響背景和目的急性肺損傷（acute lung injury, ALI）的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,但多種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)以及效應(yīng)細(xì)胞共同參與的、過度失控的炎癥反應(yīng)是發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。由于炎癥反應(yīng)的環(huán)節(jié)眾多、過程復(fù)雜,難以選擇有效的靶點(diǎn),故缺乏有效的抗炎治療方法,ALI的病死率仍相當(dāng)高。致病因子參與的炎癥反應(yīng)的上游環(huán)節(jié)則簡(jiǎn)單得多,可能會(huì)成為防治過度炎癥反應(yīng)的靶點(diǎn)。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是革蘭陰性桿菌的主要致病成分,是導(dǎo)致ALI的重要致病因素。LPS由Toll樣受體4（Toll like receptor 4, TLR4）及髓樣分化蛋白-2（myeloid differentiation protein 2, MD-2）組成的復(fù)合受體介導(dǎo)跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),并通過激活效應(yīng)細(xì)胞內(nèi)的一系列下游信號(hào)分子,引起細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的大量釋放。MD-2在識(shí)別LPS和輔助TLR4將LPS信號(hào)轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)的過程中起到核心作用。本研究探討MD-2在LPS所致大鼠ALI中的作用,以及RNA干擾沉默肺泡巨噬細(xì)胞MD-2基因?qū)PS/TL... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：100 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

LPS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑示意圖

界刺激反應(yīng)減弱，部分大鼠口鼻有紅色泡沫樣液體溢出。LPS組大鼠的肺組織W心為5.59士0.25，對(duì)照組大鼠的肺組織W心為4.23士0.19，前者顯著增高(t=9.607，P<0.ol)。圖1一l劃蘭\O將磁黔洲咬滲-KLPS組對(duì)照組圖1一1、大鼠肺組織濕/干比值注:*與對(duì)照組比較，P<0.ol，n=5二、肺組織病理形態(tài)學(xué)改變1、大體觀察:對(duì)照組大鼠肺臟外觀色澤粉紅，表面未見損傷病灶，包膜光滑，彈性好，切面干凈;LPS組大鼠肺臟體積增大，色澤暗紅，可見包膜下點(diǎn)、片狀癖血和出血點(diǎn)，臟層胸膜張力較高，切面疏松濕潤(rùn)，有淡紅色液體溢出。2、光鏡下觀察:肺組織石蠟切片HE染色顯示，對(duì)照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔清晰，腔內(nèi)無滲液，肺泡壁光滑，肺泡和肺間質(zhì)無炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(照片1一IA、ZA、3A)。

對(duì)提取的細(xì)胞總RNA經(jīng)紫外分光光度計(jì)測(cè)定 A260/A280為 1.8一2.0，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后可見285和 185區(qū)帶，說明所提取的RNA純度高，完整性好。圖1一2圖1一2、細(xì)胞總RNA電泳圖2)半定量Rl’ -PCR檢測(cè)MD一 2mRNA表達(dá):半定量Rl’ -pcR結(jié)果顯示MD一2基因的擴(kuò)增產(chǎn)物為 133bp(內(nèi)參p一actin基因擴(kuò)增產(chǎn)物為4O0bp)處唯一的擴(kuò)增條帶，說明目的基因PcR產(chǎn)物特異性良好。圖1一3

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)研究活細(xì)胞TLR4與MD-2作用結(jié)構(gòu)域[J]. 鐘田雨,唐靖,陳登宇,劉亞偉,王蔚,劉靖華,姜勇.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2009(11)
[2]TLR4信號(hào)通路與炎性反應(yīng)[J]. 陳潔,姜虹.  醫(yī)學(xué)綜述. 2009(19)
[3]吸入一氧化氮對(duì)脂多糖所致大鼠急性肺損傷環(huán)氧合酶-2及TOLL樣受體4表達(dá)的影響[J]. 吳妍雯,白明,張建初.  華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2009(03)
[4]脂多糖結(jié)合蛋白抑制肽對(duì)脂多糖與內(nèi)毒素血癥小鼠肺泡巨噬細(xì)胞結(jié)合的影響[J]. 吳學(xué)玲,趙云峰,錢桂生,徐德彬,陳維中.  中國(guó)呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志. 2008(03)
[5]MD2在內(nèi)毒素激活肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞中的表達(dá)及作用[J]. 李永旺,張德明,錢桂生,毛寶齡.  重慶醫(yī)學(xué). 2007(16)
[6]LPS致大鼠肺泡巨噬細(xì)胞NF-κB促進(jìn)TNF-α分泌[J]. 張方,李子玲,施毅,趙明,辛?xí)苑?錢桂生.  中國(guó)病理生理雜志. 2007(07)
[7]RNA干擾技術(shù)抑制BAG-1在大鼠肺泡巨噬細(xì)胞表達(dá)及恢復(fù)GR抗炎效應(yīng)的研究[J]. 張方,施毅,李子玲,錢桂生,羅向東,趙明,宋勇.  中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志. 2007(03)
[8]全長(zhǎng)hlrp分子在多種細(xì)胞系中的表達(dá)及其分析[J]. 畢媛,駱文靜,侯立朝,蔡同建,陳耀明,劉明朝,陳景元,杜可軍.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2007(05)
[9]人lrp-cDNA全長(zhǎng)編碼區(qū)的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)[J]. 宋慶賀,柴玉波,陳蘇民,陳南春,黃勇,代忠明.  第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2006(05)
[10]膿毒癥大鼠心肌Toll樣受體4和髓樣分化蛋白-2基因表達(dá)的變化和意義[J]. 杜曉輝,李榮,徐迎新,姚詠明,申傳安,尹會(huì)男.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2006(03)



本文編號(hào)：3311025