香煙煙霧致RLE-6TN細(xì)胞損傷中線(xiàn)粒體自噬水平的變化及機(jī)制
發(fā)布時(shí)間：2021-07-11 17:15
研究目的:本實(shí)驗(yàn)研究香煙煙霧提取物（Cigarette Smoke Extract,CSE）是否能誘導(dǎo)RLE-6TN細(xì)胞發(fā)生線(xiàn)粒體自噬,并進(jìn)行了相關(guān)機(jī)制的初步探討,為慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）的治療提供新的思路。研究方法:1.MTT比色法測(cè)定香煙煙霧提取物（Cigarette Smoke Extract,CSE）對(duì)RLE-6TN細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用,確定CSE的最適刺激時(shí)間和濃度。2.透射電鏡檢測(cè)RLE-6TN細(xì)胞在CSE刺激下的線(xiàn)粒體形態(tài)變化。3.流式細(xì)胞術(shù)或多功能酶標(biāo)儀定量檢測(cè)方法檢測(cè)RLE-6TN細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位（Mitochondrial Membrane Potential,MMP）、細(xì)胞內(nèi)活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）水平、線(xiàn)粒體內(nèi)ROS水平及ATP的變化。4.Western blotting方法和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)LC3B、P62的表達(dá)水平。5.Western blotting方法檢測(cè)細(xì)胞總蛋白和線(xiàn)粒體/胞漿蛋白中PINK1、Parkin、Drp1及Mfn2的表達(dá)...
【文章來(lái)源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
CSE處理RLE-6TN細(xì)胞后的生長(zhǎng)抑制率（%）*P﹤0.05，***P﹤0.001Fig.1GrowthinhibitionrateofcellstreatedwithCSEatdifferenttimesanddifferent
14圖 2 透射電鏡檢測(cè)線(xiàn)粒體損傷情況Fig.2 Transmission electron microscopy was used to detect mitochondrial damage.透射電鏡檢測(cè)線(xiàn)粒體損傷情況：A. Control 組（×10000），B. Control 組（×20000），C. 5%CSE 組（×10000），D. 5%CSE 組（×20000）。2.2 CSE 誘導(dǎo)的 RLE-6TN 細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位（MMP）變化使用不同濃度的 CSE 刺激 RLE-6TN 細(xì)胞后，用羅丹明 123 探針進(jìn)行孵育，F(xiàn)lexstation 3 多功能酶標(biāo)儀定量檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與 Control 組相比，CSE 組平均熒光強(qiáng)度占比（%）顯著降低，且呈劑量依賴(lài)關(guān)系（P﹤0.05）（圖-3B）。選取濃度為5%CSE 處理細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，CSE 組平均熒光強(qiáng)度占比（%）顯著降低（P﹤0.05）（圖-3A）。
圖 3 羅丹明 123 染料檢測(cè)細(xì)胞 MMP 變化Fig.3 The changes of intracellular mitochondrial membrane potential(MMP) were detected byRhodamine 123. *P﹤0.05，**P﹤0.01，***P ﹤0.001.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) RLE-6TN 細(xì)胞內(nèi) MMP 變化（A），a：Control 組，b：5%CSE 組，c：CCCP 組，d：與 Control 組比較，*P﹤0.05；多功能酶標(biāo)儀定量檢測(cè) MMP 變化（B），與Control 組比較，**P﹤0.01，***P﹤0.001。2.3 CSE 誘導(dǎo)的 RLE-6TN 細(xì)胞活性氧變化（1）CSE 誘導(dǎo)的 RLE-6TN 細(xì)胞內(nèi) ROS 變化使用 5%CSE 刺激細(xì)胞，用 DCFH-DA 探針對(duì) RLE-6TN 細(xì)胞進(jìn)行孵育，F(xiàn)lexstation 3 多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與 Control 組相比，CSE 組平均熒光強(qiáng)度占比（%）顯著增高（P﹤0.05）（圖 4-A）。由此可見(jiàn)，在 CSE 刺激下，RLE-6TN細(xì)胞內(nèi) ROS 水平升高。
本文編號(hào)：3278513
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【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
CSE處理RLE-6TN細(xì)胞后的生長(zhǎng)抑制率（%）*P﹤0.05，***P﹤0.001Fig.1GrowthinhibitionrateofcellstreatedwithCSEatdifferenttimesanddifferent
14圖 2 透射電鏡檢測(cè)線(xiàn)粒體損傷情況Fig.2 Transmission electron microscopy was used to detect mitochondrial damage.透射電鏡檢測(cè)線(xiàn)粒體損傷情況：A. Control 組（×10000），B. Control 組（×20000），C. 5%CSE 組（×10000），D. 5%CSE 組（×20000）。2.2 CSE 誘導(dǎo)的 RLE-6TN 細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位（MMP）變化使用不同濃度的 CSE 刺激 RLE-6TN 細(xì)胞后，用羅丹明 123 探針進(jìn)行孵育，F(xiàn)lexstation 3 多功能酶標(biāo)儀定量檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與 Control 組相比，CSE 組平均熒光強(qiáng)度占比（%）顯著降低，且呈劑量依賴(lài)關(guān)系（P﹤0.05）（圖-3B）。選取濃度為5%CSE 處理細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，CSE 組平均熒光強(qiáng)度占比（%）顯著降低（P﹤0.05）（圖-3A）。
圖 3 羅丹明 123 染料檢測(cè)細(xì)胞 MMP 變化Fig.3 The changes of intracellular mitochondrial membrane potential(MMP) were detected byRhodamine 123. *P﹤0.05，**P﹤0.01，***P ﹤0.001.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) RLE-6TN 細(xì)胞內(nèi) MMP 變化（A），a：Control 組，b：5%CSE 組，c：CCCP 組，d：與 Control 組比較，*P﹤0.05；多功能酶標(biāo)儀定量檢測(cè) MMP 變化（B），與Control 組比較，**P﹤0.01，***P﹤0.001。2.3 CSE 誘導(dǎo)的 RLE-6TN 細(xì)胞活性氧變化（1）CSE 誘導(dǎo)的 RLE-6TN 細(xì)胞內(nèi) ROS 變化使用 5%CSE 刺激細(xì)胞，用 DCFH-DA 探針對(duì) RLE-6TN 細(xì)胞進(jìn)行孵育，F(xiàn)lexstation 3 多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與 Control 組相比，CSE 組平均熒光強(qiáng)度占比（%）顯著增高（P﹤0.05）（圖 4-A）。由此可見(jiàn)，在 CSE 刺激下，RLE-6TN細(xì)胞內(nèi) ROS 水平升高。
本文編號(hào)：3278513
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