目的探討肺泡巨噬細(xì)胞Toll樣受體4/髓樣分化因子88（TLR-4/My D88）信號(hào)通路在呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷中的作用。方法 30只成年SD大鼠行經(jīng)口氣管插管,給予40 m L/kg潮氣量通氣240 min,建立呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷模型,機(jī)械通氣結(jié)束后,使用4℃PBS經(jīng)氣管導(dǎo)管緩慢注入并回收支氣管肺泡灌洗液（BALF）,提純肺泡巨噬細(xì)胞。收集并培養(yǎng)肺泡巨噬細(xì)胞,隨機(jī)分為3組:PBS刺激組（CON組）;TNF-α刺激聯(lián)合PBS組（STI組）;TNF-α刺激聯(lián)合抗TLR4單克隆抗體（m Ab）干預(yù)組（ANT組）;每組8個(gè)樣本。CON組細(xì)胞用PBS結(jié)合2 h后,繼續(xù)用PBS培養(yǎng)16 h;STI組細(xì)胞用PBS結(jié)合2 h后,采用20 ng/m L TNF-α培養(yǎng)16 h;ANT組細(xì)胞用PBS液及TLR4 m Ab結(jié)合2 h后,用20 ng/m L TNF-α培養(yǎng)16 h。ELISA檢測(cè)各組上清液TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá);反轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)各組肺泡巨噬細(xì)胞TLR4、TLR9、髓樣分化因子88（My D88）、核因子κB（NF-κB）的mRNA表達(dá),Western blot法檢測(cè)各組肺泡巨... 

【文章來(lái)源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2015,31(02)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

三組大鼠支氣管肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6和TNF-α的

AM中MyD88、NF-κB、TLＲ4和TLＲ9的mＲNA表達(dá)

(P＜0．05，圖3)，但TLＲ9的表達(dá)水平與CON組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05);ANT組的AM中TLＲ4、MyD88和NF-κB蛋白水平明顯低于STI組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05，圖3)，但TLＲ9的水平與STI組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。aP＜0．05vsCON組;cP＜0．05vsSTI組．圖3巨噬細(xì)胞MyD88、NF-κB、TLＲ4和TLＲ9的蛋白表達(dá)3討論機(jī)械通氣是臨床麻醉和治療ALI/AＲDS常用的重要治療手段，而機(jī)械通氣應(yīng)用不當(dāng)是呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷的主要病因，但其發(fā)病機(jī)制尚不清楚，主要認(rèn)為是機(jī)械力的刺激及炎癥因子釋放異常的相互作用引起［6］。AM廣泛分布于肺泡內(nèi)以及支氣管肺泡上皮表面，是氣道固有免疫第一道防線的重要組分之一，其在支氣管肺泡局部的固有免疫防御及過(guò)度免疫導(dǎo)致非細(xì)菌性炎癥損害等方面的作用，近年來(lái)備受關(guān)注。AM在機(jī)械牽拉、感染等刺激作用下被激活，激活后其不僅具有較強(qiáng)的吞噬功能，并且能合成分泌多種炎癥因子如IL-6、IL-1β、TNF-α等，誘發(fā)加重肺泡局部炎癥反應(yīng)［5］。Frank等［7］研究表明，AM參與VILI的發(fā)生、發(fā)展，可能是VILI初始發(fā)病機(jī)制的重要因素之一。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在大潮氣量通氣后導(dǎo)致了肺泡灌洗液中及AM培養(yǎng)上清液的IL-1β、IL-6、TNF-α的含量增加，主要原因是由于機(jī)械通氣產(chǎn)生的過(guò)度牽張、剪切力等機(jī)械刺激作用于AM，并將其轉(zhuǎn)導(dǎo)成生物化學(xué)信號(hào)傳入細(xì)胞內(nèi)，導(dǎo)致局部炎癥細(xì)胞激活和炎性反應(yīng)擴(kuò)大，引起細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)的大量釋放，造成肺組織炎癥性損傷［8］。TLＲ是一類重要的模式識(shí)別受體，能特異性識(shí)別病原相關(guān)分子模式(pathogenassociatedmolecularpatterns，PAMP)，調(diào)節(jié)固有免疫和獲得性免疫。TLＲ4的外源性配體LPS是Gram－菌細(xì)胞壁外膜層的主要成分，可以活化炎性細(xì)胞

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Toll樣受體3和4在大鼠呼吸機(jī)相關(guān)肺損傷肺組織中的表達(dá)[J]. 朱珊,潘靈輝,林飛,趙瓊,魏癑.  臨床麻醉學(xué)雜志. 2013(06)



本文編號(hào)：3262935