目的:建立一種切實可行的胚胎大鼠背根神經節(jié)神經元培養(yǎng)及純化方法,研究MEF2C在背根神經節(jié)神經元細胞內表達對P物質和低分子量神經絲微管蛋白基因表達的影響以及MEF2C與氣道高反應性發(fā)生間可能的關系。方法:利用顯微解剖獲取足夠數量的胚胎大鼠背根神經節(jié),通過胰蛋白酶+EDTA消化、交替使用NB培養(yǎng)基與加入了5-氟-2-脫氧尿嘧啶核苷酸/尿苷的抗有絲分裂NB培養(yǎng)基等方法在體外獲得純化的背根神經節(jié)神經元,采用神經絲蛋白免疫細胞化學染色法與DAPI染核的方法鑒定并測定神經元的純度。分離培養(yǎng)背根神經節(jié)神經元細胞,然后暴露于不同濃度的NGF下24小時,最后用實時聚合酶鏈反應技術檢測P物質與低分子量神經絲微管蛋白基因在背根神經節(jié)神經元細胞內的表達。通過化學轉染方法將合成的3條siRNA-Mef2c分別轉染PC12細胞,并用實時聚合酶鏈反應技術篩選轉染效率最高的siRNA。采用化學轉染方法干擾背根神經節(jié)神經元細胞內MEF2C的表達,在高濃度神經生長因子刺激背根神經節(jié)神經元細胞后采用實時聚合酶鏈反應技術檢測干擾后背根神經節(jié)神經元細胞內P物質與低分子量神經絲微管蛋白基因的表達。結果:1、獲得的背根神經節(jié)神經... 

【文章來源】：中南大學湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：45 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

免疫細胞化學熒光顯微鏡下觀翻x200地.DRGn胞體及突觸被anti一NF200標記;e.DAPI

圖3不同濃度NGF刺激下P物質及Nn的表達:A隨培養(yǎng)基內NGF濃度的不同P物質表達的變化，B隨培養(yǎng)基內NGF濃度的不同Nn表達的變化表1不同濃度NGF刺激下P物質與Nfl表達的變化GeneNFLP一Sllbname10ng/ml3Ong/mlIOOng/ml1.32士0.071.41士0.122.23士0.203.44士0.18ZOOng/ml2.93士0.103.61士0.133siRNA一MenC干擾實驗3.1篩選干擾效率最高的siRNA一Me幾c采用2一幽CT統計方法對3條干擾PC12細胞內MefZ。的效率進行半定量分析，結果發(fā)現合成的3條SIRNAsiRNA一Me幾c一1、siRNA一MefZc一2和siRNA一MefZc一3對Me幾c的干擾效率分別為0.04、0.54和0.66，同時我們檢測相應siRNA一MefZc一3的脫靶效應，發(fā)現SIRNA一Me幾c一3干擾過程中沒有對Creb的表達形成明顯的影

圖4篩選干擾效率最高的siRNA一Menc:A3條不同siRNA一Men。干擾效率檢瀏結果BsiRNA一Me幾c一3干擾PC12細胞內Creb的表達無變化3.2對DRG神經元原代細胞內Me幾c干擾效率的檢測采用2一△△CT統計方法對采用s1RNA一Me幾c一3干擾后DRG神經元原代細胞內MefZc表達結果進行分析，發(fā)現NGF高濃度(loong/rn工)組神經元細胞內MefZc的表達較對照組下降50%(P<0.05)，免疫熒光實驗沒有檢測到對Creb表達的影響。P物質與NFL在RNA水平的表達受到了干擾MEFZC的影響，分別較對照組下降41%(p<0.05)與61%(p<0.05)。在NGF低濃度(long/mL)組神經元細胞內MefZc的表達較對照組下降41%，P物質與NFL在RNA水平的表達受到了干擾MEFZC的影像，分別較對照組下降16%(P<0.05)與36%(P<0.05)。NGF10一創(chuàng).LsiR人A~co.口rol、GFIO.側.LsiRXA一、IefZe一3NGF100一留.L51只NA一eo一打。l

【參考文獻】：
期刊論文
[1]神經生長因子對培養(yǎng)的大鼠背根神經節(jié)神經元P物質釋放的調節(jié)作用（英文）[J]. 楊向東,劉真,劉花香,王麗紅,馬春紅,李振中.  Neuroscience Bulletin. 2007(04)
[2]Effects of respiratory syncytial virus infection on the airway neuronal plasticity and its relationship to the bronchial hyperresponsiveness in rats[J]. SHEN Xiao-yue, PAN Pin-hua, WU E-sheng and HU Cheng-ping Department of Respiratory Medicine, Xiangya Hospital, Central South University, Changsha 410008, China (Shen XY, Pan PH, Wu ES and Hu CP).  Chinese Medical Journal. 2006(02)



本文編號：3261549