目的觀察Wnt經(jīng)典通路對ARDS時MSC向肺上皮細(xì)胞定向分化時細(xì)胞自噬的調(diào)節(jié)作用,并觀察MSC的PTEN-PI3K/Akt/mTOR通路信號分子變化,明確Wnt經(jīng)典通路對MSC向肺泡上皮細(xì)胞定向分化過程中細(xì)胞自噬調(diào)控的分子機制,為進一步提高MSC治療ARDS的療效提供實驗基礎(chǔ)。方法首先,用全骨髓細(xì)胞貼壁法進行MSC的培養(yǎng)和純化,并通過觀察形態(tài)（MSC呈梭形,類似于成纖維細(xì)胞）、用流式細(xì)胞儀檢測其表面標(biāo)志物（CD90[+]、CD29[+]、CD45[-]）和是否能誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞和骨細(xì)胞來鑒定是否為MSC。其次,將8¹0周的C57BL/c小鼠分為對照組和實驗組,實驗組通過氣管注入5mg/Kg的LPS復(fù)ARDS模型,對照組氣管注入等體積的NS,來建立ARDS小鼠模型。再將ARDS小鼠模型復(fù)制后1h將小鼠處死,提取肺細(xì)胞。然后,將懸掛式transwell小室,將小鼠肺細(xì)胞、小鼠骨髓MSC建立體外共培養(yǎng)實驗?zāi)Ｐ汀Ｖ?將體外培養(yǎng)誘導(dǎo)MSC向肺上皮細(xì)胞定向分化模型進行以下分組和處理:a.空白組:MSC單獨培養(yǎng);b.對照組:MSC+正常肺細(xì)胞;c.損傷肺細(xì)胞組:MSC+LP... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Tranawell小室實物圖

實驗結(jié)果實驗結(jié)果骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定結(jié)果觀察代培養(yǎng)時，全骨髓貼壁法分離的骨髓細(xì)胞呈圓形，胞體透亮，大小不細(xì)胞等血系細(xì)胞相互混雜。72h 半量換液后可見大量貼壁細(xì)胞，6~7d 成不同大小、分散的細(xì)胞集落， 9~10d 細(xì)胞逐漸融合成片，相互緊密貼化傳代至第 3 代，可見細(xì)胞呈均勻分布的紡錘形平均生，呈典型的漩渦1。

圖 3.2 流式細(xì)胞儀鑒定 BMSCs 表面分子標(biāo)志 Fig 3 BMSCs surface molecules identified by flowcytometry3.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨、成脂分化能力鑒定①骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化能力鑒定大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)骨向誘導(dǎo)后形態(tài)由原來的紡錘形逐漸轉(zhuǎn)化為多角形、形等，較對照組細(xì)胞體積更大，細(xì)胞外基質(zhì)分泌逐漸增多，胞外可見許多黑色細(xì)小粒(見圖 3.3) 。骨向誘導(dǎo) 12d 后以改良鈣鈷法進行堿性磷酸酶染色，胞漿內(nèi)呈現(xiàn)深棕或深黑色顆粒狀或大片狀黑色沉淀(見圖 3.4)，同時堿性磷酸酶活力明顯升高 (P<0.0見圖 3.5)；骨向誘導(dǎo) 21d 后運用茜素紅進行礦化結(jié)節(jié)染色，光鏡下誘導(dǎo)組可見細(xì)胞合重疊生長，形成明顯的紅色致密結(jié)節(jié)，周圍呈放射狀突起，表明細(xì)胞形成礦化結(jié)節(jié)

【參考文獻】：
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