目的:闡明線粒體DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）對脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）誘導肺泡巨噬細胞（NR8383）炎癥反應的放大作用,轉(zhuǎn)染TLR9 siRNA后能抑制線粒體DNA的放大作用,并探討線粒體DNA對LPS誘導肺泡巨噬細胞炎癥反應的作用機制。方法:1)用線粒體DNA試劑盒提取mtDNA,并通過瓊脂糖凝膠電泳檢測所提取的mtDNA純度。2)采用不同濃度梯度的mtDNA干預LPS誘導的肺泡巨噬細胞（NR8383）,將實驗分組為Control組、LPS組、0.25μg/ml mtDNA+LPS組、0.5μg/ml mtDNA+LPS組、1μg/ml mtDNA+LPS組。LPS的終濃度為0.5μg/ml,24h后收集細胞上清液,采用酶聯(lián)免疫吸附實驗（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）檢測炎癥因子TNF-α的含量,明確mtDNA放大LPS誘導肺泡巨噬細胞炎癥作用及mtDNA最適濃度。3)體外50nM的TLR9siRNA轉(zhuǎn)染細胞48h,采用RT-qPCR檢測肺泡巨噬細胞中TLR9 mRNA的表達... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

瓊脂糖電泳顯示所提取的mtDNA

mtDNA 刺激肺泡巨噬細胞（*表示與 control 組相比，LPS 組相比，P＜0.05）TLR9siRNA后TLR9表達下調(diào) 結(jié)果，與對照組相比，TLR9siRNA 組的 TLR9表明轉(zhuǎn)染成功（P＜0.05）（見圖 3.3）。iRNA 的表達情況（與 Control 組相比，NS 為無統(tǒng)計

18LR9siRNA 的表達情況（與 Control 組相比，NS 為無統(tǒng)計學意0.05）檢測上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白的表TNF-α、IL-1β、IL-6分別為513.00±28.02pg/ml、539.080pg/ml，LPS+mtDNA 組的 TNF-α、IL-1β、IL-6 分別756.33±18.89pg/ml、477.50±15.82pg/ml ，與 LP

【參考文獻】：
期刊論文
[1]TLR4在妊娠異常終止中的作用機制和研究進展[J]. 張誼,何自標,陳晨,鮮紅,張明.  中國畜牧獸醫(yī). 2014(07)



本文編號：3222154