目的:闡明線粒體DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）對(duì)脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞（NR8383）炎癥反應(yīng)的放大作用,轉(zhuǎn)染TLR9 siRNA后能抑制線粒體DNA的放大作用,并探討線粒體DNA對(duì)LPS誘導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制。方法:1)用線粒體DNA試劑盒提取mtDNA,并通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)所提取的mtDNA純度。2)采用不同濃度梯度的mtDNA干預(yù)LPS誘導(dǎo)的肺泡巨噬細(xì)胞（NR8383）,將實(shí)驗(yàn)分組為Control組、LPS組、0.25μg/ml mtDNA+LPS組、0.5μg/ml mtDNA+LPS組、1μg/ml mtDNA+LPS組。LPS的終濃度為0.5μg/ml,24h后收集細(xì)胞上清液,采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）檢測(cè)炎癥因子TNF-α的含量,明確mtDNA放大LPS誘導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞炎癥作用及mtDNA最適濃度。3)體外50nM的TLR9siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h,采用RT-qPCR檢測(cè)肺泡巨噬細(xì)胞中TLR9 mRNA的表達(dá)... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

瓊脂糖電泳顯示所提取的mtDNA

mtDNA 刺激肺泡巨噬細(xì)胞（*表示與 control 組相比，LPS 組相比，P＜0.05）TLR9siRNA后TLR9表達(dá)下調(diào) 結(jié)果，與對(duì)照組相比，TLR9siRNA 組的 TLR9表明轉(zhuǎn)染成功（P＜0.05）（見(jiàn)圖 3.3）。iRNA 的表達(dá)情況（與 Control 組相比，NS 為無(wú)統(tǒng)計(jì)

18LR9siRNA 的表達(dá)情況（與 Control 組相比，NS 為無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意0.05）檢測(cè)上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白的表TNF-α、IL-1β、IL-6分別為513.00±28.02pg/ml、539.080pg/ml，LPS+mtDNA 組的 TNF-α、IL-1β、IL-6 分別756.33±18.89pg/ml、477.50±15.82pg/ml ，與 LP

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]TLR4在妊娠異常終止中的作用機(jī)制和研究進(jìn)展[J]. 張誼,何自標(biāo),陳晨,鮮紅,張明.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2014(07)



本文編號(hào)：3222154