研究目的:1.明確同源結(jié)構(gòu)域相互作用蛋白激酶2（HIPK2）在小鼠成纖維細胞凋亡過程中的作用及可能作用機制;2.明確外源調(diào)控HIPK2對JNK凋亡信號通路的影響,并初步探討二者之間的可能調(diào)控機制。3.探究HIPK2過表達對博來霉素（Bleomycin,BLM）誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠肺纖維化及JNK通路的影響。研究方法:購買含綠色熒光蛋白（Green Flurescence Protein,GFP）示蹤基因的HIPK2腺病毒載體（Ad-HIPK2）和靶向HIPK2的特異性shRNA腺病毒載體（Ad-sh-HIPK2）。體外培養(yǎng)小鼠肺成纖維細胞（MLF）,并分為7組:（1）單純腺病毒載體感染組:Ad-GFP組、Ad-HIPK2組、Ad-sh-control組和Ad-sh-HIPK2組;（2）加入JNK抑制劑SP60025后分組為Ad-GFP組、Ad-HIPK2組和Ad-HIPK2+SP600125組。隨后用CCK8、流式細胞式及Transwell法檢測增殖、凋亡及侵襲能力,RT-PCR檢測各組細胞HIPK2、JNK、Daxx、Bax、Bc1-2、caspase3、CollaⅠ/Ⅲ、及α-... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Westernblot檢測各組肺成纖維細胞HIPK2,JNK,Bax,Bcl-2,caspase3,CollaI,CollaIII,α-SMA蛋白表達

青島大學(xué)碩士論文1431.000±0.000Ad-HIPK231.484±0.035-23.872#0.000Ad-sh-control31.000±0.000Ad-sh-HIPK230.523±0.03027.092*0.000HIPK2蛋白表達量以HIPK2蛋白條帶亮度值與其對應(yīng)的內(nèi)參照（GAPDH）的亮度值的比值表示。#：與Ad-GFP組相比；*：與Ad-sh-control組相比。圖3.1.1各組細胞HIPK2蛋白表達的柱狀圖。#：與Ad-control組相比，P<0.05；*：與Ad-sh-control組相比，P<0.05。3.1.2各組細胞JNK的蛋白表達水平與Ad-GFP組相比，Ad-HIPK2組JNK蛋白表達增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-66.446,P＜0.05）。與Ad-sh-control組相比，Ad-sh-HIPK2組JNK蛋白表達減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=81.004,P＜0.05）。表3.1.2WB檢測各組細胞中JNK蛋白的表達水平組別n（JNK/GAPDH，x±s）t值P值A(chǔ)d-GFP31.000±0.000Ad-HIPK233.059±0.054-66.446#0.000Ad-sh-control31.000±0.000Ad-sh-HIPK230.519±0.01081.004*0.000JNK蛋白表達量以JNK蛋白條帶亮度值與其對應(yīng)的內(nèi)參照（GAPDH）的亮度值的比值表示。#：與Ad-GFP組相比；*：與Ad-sh-control組相比。

實驗結(jié)果15圖3.1.2各組細胞JNK蛋白表達的柱狀圖。#：與Ad-control組相比，P<0.05；*：與Ad-sh-control組相比，P<0.05。3.1.3各組細胞Daxx的蛋白表達水平與Ad-GFP組相比，Ad-HIPK2組Daxx蛋白表達增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-35.216,P＜0.05）。與Ad-sh-control組相比，Ad-sh-HIPK2組Daxx蛋白表達減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=44.752,P＜0.05）。表3.1.3WB檢測各組細胞中Daxx蛋白的表達水平組別n（Daxx/GAPDH，x±s）t值P值A(chǔ)d-GFP31.000±0.000Ad-HIPK233.440±0.012-35.216#0.000Ad-sh-control31.000±0.000Ad-sh-HIPK230.456±0.02144.752*0.000Daxx蛋白表達量以Daxx蛋白條帶亮度值與其對應(yīng)的內(nèi)參照（GAPDH）的亮度值的比值表示。#：與Ad-GFP組相比；*：與Ad-sh-control組相比。


本文編號：3213723