急性肺損傷（acute lung injury,ALI）和急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）是嚴重的肺部疾病,主要病理表現(xiàn)為炎性細胞聚集、細胞因子釋放增多及呼吸功能不全,部分病人因呼吸障礙而導致死亡。急性肺損傷病理機制復雜,其中巨噬細胞活化釋放大量炎癥因子,促進嗜中性粒細胞聚集,誘導內皮細胞和上皮細胞損傷,是ALI重要發(fā)病機制。因此,闡明巨噬細胞活化機制對于理解急性肺損傷的發(fā)病機理具有重要意義。急性肺損傷發(fā)病范圍廣、發(fā)病率和死亡率較高,臨床缺乏有效治療手段。因此,闡明急性肺損傷發(fā)病機制,鑒定有效藥物靶標,開發(fā)潛在治療藥物對于治療急性肺損傷至關重要。蛋白激酶MK2是p38 MAPK（mitogen-activated protein kinase）的重要下游蛋白激酶,參與調控細胞因子產生、轉錄因子活化及炎癥受體表達,是調控炎癥反應的關鍵分子。為探討MK2是否調控急性肺損傷,我們利用MK2基因敲除(MK2^-/-)小鼠,構建敗血癥模型LPS（lipopolysaccharide）和CLP（cecal l... 

【文章來源】：上海交通大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：139 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 急性肺損傷概述
    1.2 巨噬細胞與肺損傷
    1.3 蛋白激酶MK2 簡介
    1.4 microRNA簡介
    1.5 傳統(tǒng)中藥研究概述
    1.6 研究意義
第二章 MK2在急性肺損傷中的作用研究及其分子機制探討
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗器材
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗動物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 巨噬細胞特異性MK2敲除(MK2_(Lyz2-KO))小鼠的建立
        2.2.2 動物模型的建立
        2.2.3 小鼠肺組織病理染色
        2.2.4 小鼠肺泡灌洗液(BALF)分離及總蛋白含量測定
        2.2.5 肺灌洗液中細胞計數(shù)
        2.2.6 流式細胞染色
        2.2.7 小鼠肺組織髓過氧化物酶(MPO)含量檢測
        2.2.8 小鼠肺組織干濕比檢測
        2.2.9 酶聯(lián)免疫吸附反應(ELISA)檢測細胞因子表達
        2.2.10 蛋白提取及免疫印跡
        2.2.11 肺巨噬細胞分離
        2.2.12 小鼠骨髓來源巨噬細胞的分離培養(yǎng)
        2.2.13 細胞RNA提取、反轉錄及熒光定量PCR
        2.2.14 microRNA轉染
        2.2.15 細胞復蘇、傳代及凍存
        2.2.16 質粒構建
        2.2.17 熒光素酶報告基因分析
        2.2.18 統(tǒng)計方法
    2.3 研究結果
        2.3.1 MK2 基因缺失降低敗血癥引起的死亡率
        2.3.2 MK2 基因缺失緩解敗血癥誘導的急性肺損傷
        2.3.3 髓系細胞特異性MK2 缺失緩解LPS誘導的急性肺損傷
        2.3.4 MK2 通過調控巨噬細胞功能調節(jié)急性炎癥反應
    2.4 討論
    2.5 小結
第三章 原百部堿通過調控巨噬細胞功能緩解LPS誘導的急性肺損傷
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗器材
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 實驗動物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞復蘇、傳代及凍存
        3.2.2 骨髓來源巨噬細胞分離培養(yǎng)
        3.2.3 MTT實驗
        3.2.4 NO含量檢測
        3.2.5 細胞或組織RNA提取、反轉錄及熒光定量PCR
        3.2.6 LPS誘導急性肺損傷模型構建
        3.2.7 小鼠肺泡灌洗液分離
        3.2.8 髓過氧化物酶含量檢測
        3.2.9 小鼠肺組織病理切片染色及評分
        3.2.10 小鼠肺灌洗液蛋白濃度測定
        3.2.11 酶聯(lián)免疫吸附反應(ELISA)檢測小鼠肺組織細胞因子含量
        3.2.12 蛋白提取及免疫印跡
        3.2.13 統(tǒng)計方法
    3.3 研究結果
        3.3.1 原百部堿下調LPS誘導的MK2 磷酸化
        3.3.2 原百部堿減弱LPS誘導的巨噬細胞MAPKs磷酸化和AKT的磷酸化
        3.3.3 原百部堿抑制LPS誘導的RAW264.7 和骨髓巨噬細胞內促炎介質的產生
        3.3.4 原百部堿緩解LPS誘導的急性肺損傷
    3.4 討論
    3.5 小結
第四章 原百部堿緩解DRA誘導的哮喘及其機制研究
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗器材
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 實驗動物
    4.2 實驗方法
        4.2.1 DRA誘導小鼠哮喘模型的構建
        4.2.2 小鼠肺泡灌洗液分離
        4.2.3 肺灌洗液中細胞計數(shù)
        4.2.4流式細胞染色實驗
        4.2.5 肺灌洗液總蛋白濃度測定(BCA法)
        4.2.6 小鼠肺組織病理切片染色
        4.2.7 小鼠血清中總IgE含量檢測
        4.2.8 小鼠組織RNA提取及熒光定量PCR
        4.2.9 小鼠骨髓巨噬細胞的分離培養(yǎng)
        4.2.10 蛋白提取及免疫印跡
        4.2.11 統(tǒng)計方法
    4.3 研究結果
        4.3.1 原百部堿緩解DRA誘導的哮喘
        4.3.2 原百部堿通過調控巨噬細胞極化介導哮喘
    4.4 討論
    4.5 小結
第五章 總結與展望
    5.1 創(chuàng)新點
    5.2 研究待解決問題
    5.3 應用前景
參考文獻
致謝
博士期間發(fā)表的學術論文
基金資助


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3201479