急性肺損傷（acute lung injury,ALI）和急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）是嚴(yán)重的肺部疾病,主要病理表現(xiàn)為炎性細(xì)胞聚集、細(xì)胞因子釋放增多及呼吸功能不全,部分病人因呼吸障礙而導(dǎo)致死亡。急性肺損傷病理機(jī)制復(fù)雜,其中巨噬細(xì)胞活化釋放大量炎癥因子,促進(jìn)嗜中性粒細(xì)胞聚集,誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞損傷,是ALI重要發(fā)病機(jī)制。因此,闡明巨噬細(xì)胞活化機(jī)制對(duì)于理解急性肺損傷的發(fā)病機(jī)理具有重要意義。急性肺損傷發(fā)病范圍廣、發(fā)病率和死亡率較高,臨床缺乏有效治療手段。因此,闡明急性肺損傷發(fā)病機(jī)制,鑒定有效藥物靶標(biāo),開(kāi)發(fā)潛在治療藥物對(duì)于治療急性肺損傷至關(guān)重要。蛋白激酶MK2是p38 MAPK（mitogen-activated protein kinase）的重要下游蛋白激酶,參與調(diào)控細(xì)胞因子產(chǎn)生、轉(zhuǎn)錄因子活化及炎癥受體表達(dá),是調(diào)控炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵分子。為探討MK2是否調(diào)控急性肺損傷,我們利用MK2基因敲除(MK2^-/-)小鼠,構(gòu)建敗血癥模型LPS（lipopolysaccharide）和CLP（cecal l... 

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【文章頁(yè)數(shù)】：139 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 急性肺損傷概述
    1.2 巨噬細(xì)胞與肺損傷
    1.3 蛋白激酶MK2 簡(jiǎn)介
    1.4 microRNA簡(jiǎn)介
    1.5 傳統(tǒng)中藥研究概述
    1.6 研究意義
第二章 MK2在急性肺損傷中的作用研究及其分子機(jī)制探討
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)器材
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 巨噬細(xì)胞特異性MK2敲除(MK2_(Lyz2-KO))小鼠的建立
        2.2.2 動(dòng)物模型的建立
        2.2.3 小鼠肺組織病理染色
        2.2.4 小鼠肺泡灌洗液(BALF)分離及總蛋白含量測(cè)定
        2.2.5 肺灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.2.6 流式細(xì)胞染色
        2.2.7 小鼠肺組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)含量檢測(cè)
        2.2.8 小鼠肺組織干濕比檢測(cè)
        2.2.9 酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞因子表達(dá)
        2.2.10 蛋白提取及免疫印跡
        2.2.11 肺巨噬細(xì)胞分離
        2.2.12 小鼠骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        2.2.13 細(xì)胞RNA提取、反轉(zhuǎn)錄及熒光定量PCR
        2.2.14 microRNA轉(zhuǎn)染
        2.2.15 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代及凍存
        2.2.16 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.17 熒光素酶報(bào)告基因分析
        2.2.18 統(tǒng)計(jì)方法
    2.3 研究結(jié)果
        2.3.1 MK2 基因缺失降低敗血癥引起的死亡率
        2.3.2 MK2 基因缺失緩解敗血癥誘導(dǎo)的急性肺損傷
        2.3.3 髓系細(xì)胞特異性MK2 缺失緩解LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷
        2.3.4 MK2 通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞功能調(diào)節(jié)急性炎癥反應(yīng)
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 原百部堿通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞功能緩解LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)器材
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代及凍存
        3.2.2 骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞分離培養(yǎng)
        3.2.3 MTT實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 NO含量檢測(cè)
        3.2.5 細(xì)胞或組織RNA提取、反轉(zhuǎn)錄及熒光定量PCR
        3.2.6 LPS誘導(dǎo)急性肺損傷模型構(gòu)建
        3.2.7 小鼠肺泡灌洗液分離
        3.2.8 髓過(guò)氧化物酶含量檢測(cè)
        3.2.9 小鼠肺組織病理切片染色及評(píng)分
        3.2.10 小鼠肺灌洗液蛋白濃度測(cè)定
        3.2.11 酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)檢測(cè)小鼠肺組織細(xì)胞因子含量
        3.2.12 蛋白提取及免疫印跡
        3.2.13 統(tǒng)計(jì)方法
    3.3 研究結(jié)果
        3.3.1 原百部堿下調(diào)LPS誘導(dǎo)的MK2 磷酸化
        3.3.2 原百部堿減弱LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞MAPKs磷酸化和AKT的磷酸化
        3.3.3 原百部堿抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 和骨髓巨噬細(xì)胞內(nèi)促炎介質(zhì)的產(chǎn)生
        3.3.4 原百部堿緩解LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 原百部堿緩解DRA誘導(dǎo)的哮喘及其機(jī)制研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)器材
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 DRA誘導(dǎo)小鼠哮喘模型的構(gòu)建
        4.2.2 小鼠肺泡灌洗液分離
        4.2.3 肺灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù)
        4.2.4流式細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)
        4.2.5 肺灌洗液總蛋白濃度測(cè)定(BCA法)
        4.2.6 小鼠肺組織病理切片染色
        4.2.7 小鼠血清中總IgE含量檢測(cè)
        4.2.8 小鼠組織RNA提取及熒光定量PCR
        4.2.9 小鼠骨髓巨噬細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        4.2.10 蛋白提取及免疫印跡
        4.2.11 統(tǒng)計(jì)方法
    4.3 研究結(jié)果
        4.3.1 原百部堿緩解DRA誘導(dǎo)的哮喘
        4.3.2 原百部堿通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞極化介導(dǎo)哮喘
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.2 研究待解決問(wèn)題
    5.3 應(yīng)用前景
參考文獻(xiàn)
致謝
博士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
基金資助


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3201479