肺纖維化的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢,至今無有效的藥物能逆轉(zhuǎn)肺纖維化的自然過程及其終末結(jié)局。本研究將通過大鼠肺纖維化模型,觀察不同時(shí)期DcR3對大鼠模型炎癥及肺纖維化程度的影響,探討DcR3對肺泡巨噬細(xì)胞、外周血淋巴細(xì)胞以及人成纖維細(xì)胞的作用,從而揭示DcR3在間質(zhì)性疾病發(fā)病機(jī)制中的作用,為治療肺纖維化奠定基礎(chǔ)。我們通過DcR3早期干預(yù)實(shí)驗(yàn)性大鼠肺纖維模型來觀察DcR3對肺纖維化大鼠巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的作用;通過轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞來觀察DcR3對肺成纖維細(xì)胞增殖及合成膠原能力的影響。采用RT-PCR和ELISA檢測炎癥因子的表達(dá)、HE和Masson染色觀察組織病理變化、羥脯氨酸測定判定肺纖維化程度、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡和淋巴細(xì)胞的活化、MTT檢測細(xì)胞的增殖、Western blot檢測膠原合成能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)DcR3干預(yù)組炎癥因子表達(dá)明顯減少,羥脯氨酸含量降低,肺泡炎癥和肺纖維化程度明顯減輕;DcR3干預(yù)組肺泡巨噬細(xì)胞增殖能力、分泌功能增強(qiáng)和外周血淋巴細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)、活化細(xì)胞比例高;兩種細(xì)胞的凋亡百分率明顯降低;DcR3促進(jìn)了肺成纖維細(xì)胞增殖及合成膠原能力,抑制了成纖維細(xì)胞的凋亡。說明Dc... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
提要
英文縮寫詞表
第1章 緒論
    1 肺纖維化的研究進(jìn)展
    2 誘騙受體3（DcR3）的研究進(jìn)展
    3 DcR3在肺纖維化疾病中的研究進(jìn)展
    4 前期工作基礎(chǔ)及本研究主旨
第2章 DcR3對肺纖維化大鼠模型的保護(hù)作用
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        1.2 主要試劑及儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 動物的飼養(yǎng)與處死
        2.2 標(biāo)本的處理
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 大鼠一般狀態(tài)的變化
        3.2 肺組織大體形態(tài)變化
        3.3 肺組織切片（HE染色和Masson三聯(lián)染色）結(jié)果
        3.4 肺組織病理程度的變化
        3.5 不同實(shí)驗(yàn)組、不同時(shí)期BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)的變化
        3.6 TNF-α、TGF-β mRNA表達(dá)量的變化
        3.7 BALF上清中TNF-α、TGF-β的含量檢測
        3.8 肺組織羥脯氨酸含量測定
    4 討論
第3章 DcR3對纖維化大鼠肺巨噬細(xì)胞和血淋巴細(xì)胞的作用
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        1.2 主要試劑及儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 動物的飼養(yǎng)與處死
        2.2 淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        2.3 巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        2.4 結(jié)果處理及統(tǒng)計(jì)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 血淋巴細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞增殖能力檢測結(jié)果
+淋巴細(xì)胞的檢測">        3.2 CD69⁺淋巴細(xì)胞的檢測
        3.3 巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)后TNF-α、TGF-β的檢測結(jié)果
        3.4 外周血淋巴細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞凋亡百分率的檢測
    4 討論
第4章 DcR3轉(zhuǎn)染人肺成纖維細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 DcR3重組真核表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2 DcR3重組真核表達(dá)載體（pvax1-DcR3）轉(zhuǎn)染人肺成纖維細(xì)胞（HLF）
        2.3 DcR3對HLF細(xì)胞增殖活性的影響
        2.4 DcR3對HLF細(xì)胞合成Col Ⅳ膠原的影響
        2.5 DcR3對HLF細(xì)胞凋亡百分率的影響
        2.6 結(jié)果處理及統(tǒng)計(jì)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 重組質(zhì)粒pvax1-DcR3的雙酶切鑒定
        3.2 pvax1-DcR3重組載體測序及序列分析結(jié)果
        3.3 轉(zhuǎn)染后RT-PCR鑒定結(jié)果
        3.4 HLF增殖能力的檢測結(jié)果
        3.5 DcR3對HLF合成Col Ⅳ的作用
        3.6 DcR3對HLF凋亡的影響
    4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及取得的科研成果
致謝
中文摘要
Abstract


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]DcR3對人肺成纖維細(xì)胞合成Ⅳ型膠原的作用[J]. 楊洋,喬俊華,安繼紅,張?jiān)?吳春風(fēng),郟博,馬忠森.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2008(10)
[2]抗人DcR3單克隆抗體的研制及其鑒定[J]. 吳春風(fēng),馬忠森,王秀麗,楊俊玲,楊洋,張?jiān)?圖們?yōu)趿?喬俊華.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2008(02)
[3]Correlation between Expression of DcR3 on Tumor Cells and Sensitivity to FasL[J]. Wenzhu Li 1,2,3 ,Changgong Zhang 1,3 ,Caixia Chen 2 and Guohong Zhuang 1,1 Anti-Cancer Research Center,Medical College,Xiamen University,422 Siming South Road,Xiamen,Fujian 361005,China; 2School of Life Science,Xiamen University,422 Siming South Road, Xiamen,Fujian 361005,China; 3 These authors contributed equally to this work.  Cellular & Molecular Immunology. 2007(06)
[4]人DcR3融合蛋白的表達(dá)、純化及多克隆抗體的制備[J]. 吳春風(fēng),馬忠森,王秀麗,楊俊玲,楊洋,張?jiān)?圖們?yōu)趿?喬俊華.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2007(12)
[5]Overexpression of decoy receptor 3 in hepatocellular carcinoma and its association with resistance to Fas ligand-mediated apoptosis[J]. Hong-Wei Shen, Shun-Liang Gao, Yu-Lian Wu, Shu-You Peng, Department of Surgery, 2nd Affiliated Hospital of Medical College, Zhejiang University,Hangzhou 310009, Zhejiang Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(38)
[6]特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化病人外周血單核細(xì)胞中DcR3基因表達(dá)的意義[J]. 王秀麗,尹金植,黃志衛(wèi),馬忠森.  中國老年學(xué)雜志. 2004(12)



本文編號：3161175