目的:研究維生素D對(duì)肺纖維化的影響及相關(guān)機(jī)制,為肺纖維化的防治提供新思路。方法:本研究主要包括三個(gè)部分:第一部分通過(guò)生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化因子β（TGF-β）誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）構(gòu)建細(xì)胞纖維化模型,通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)及Western blot檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)情況確定造模是否成功。第二部分主要研究1,25-（OH）2D3對(duì)TGF-β引起細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響。第一部分結(jié)果顯示,分別以5 ng/ml和10 ng/ml TGF-β可以引起A549細(xì)胞和BEAS-2B細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。通過(guò)CCK-8和前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定維生素D（1,25-（OH）2D3）的劑量分別為10 n M和50 n M。實(shí)驗(yàn)分為四組:空白對(duì)照組、TGF-β組、維生素D組、TGF-β和維生素D聯(lián)合處理組。通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞的遷移能力,Transwell實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞的侵襲能力、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的抗凋亡能力、免疫熒光了解E-cad、Vimentin、VDR表達(dá)位置和表達(dá)量的改變情況,Western blot檢測(cè)E-cad、Vimentin、β-catenin、Snail、Slug、VDR的表達(dá)情況,RT-PCR檢測(cè)纖維... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

肺組織損傷修復(fù)的四個(gè)階段

圖 2 EMT 形態(tài)學(xué)及標(biāo)志蛋白改變?cè)诮M織損傷修復(fù)和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中, TGF-β 均起著重要作用。TGF-β 是一種具有多種功能的細(xì)胞因子，他通過(guò)影響細(xì)胞增生、分化、凋亡和產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)來(lái)調(diào)節(jié)組織形態(tài)和功能[6]。研究表明在各種纖維化疾病的動(dòng)物模型中 TGF-β 含量升高[7-9]

TGF-β處理A549細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)改變(100X)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Snail基因修飾對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)穩(wěn)定作用及促遷移和對(duì)無(wú)血清培養(yǎng)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用研究[J]. 查運(yùn)紅,梅元武,毛玲,賀杰峰,殷濤,張立,王全勝.  生物工程學(xué)報(bào). 2007(04)



本文編號(hào)：3131340