背景急性肺損傷（acute lung injury,ALI）是臨床常見的呼吸系統(tǒng)危重癥之一,感染是導(dǎo)致ALI的常見原因,也是該病的首位高危因素。革蘭氏陰性桿菌是目前臨床感染中主要的病原菌,易導(dǎo)致ALI,主要是由于其外膜上的脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）,又稱內(nèi)毒素（endotoxin）活化炎性細(xì)胞釋放大量炎癥因子所致,故LPS是介導(dǎo)ALI的重要啟動子。肺泡巨噬細(xì)胞（alveolar macrophage,AM）廣泛分布于肺及氣道上皮內(nèi),是呼吸道的免疫核心細(xì)胞,也是LPS的主要效應(yīng)細(xì)胞。AM表面可表達(dá)多種識別病原體的受體,如Toll蛋白樣受體4（Toll-like receptor 4,TLR4）、髓樣細(xì)胞表達(dá)的激發(fā)受體（triggering receptorsexpressed on myeloid cells,TREMs）、清道夫受體（scavenger receptors,SR）等,LPS通過與這些模式識別受體（pattern recognition receptors,PRRs）結(jié)合,啟動跨膜及細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo),是引起過度炎癥反應(yīng)及ALI的主要因素之一。研究... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：175 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

TREM家族與TLR的受體信號通路RNA干擾(RNAinte幣rence，RNAi)是新近發(fā)展起來的一種封閉基因表達(dá)的有效方法，為基因治療疾病開啟了一扇希望之門

山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文結(jié)果1重組質(zhì)粒構(gòu)建模式圖(圖1一l)Bam川位點(diǎn)正義序列LOOP環(huán)反義序列Hindm位點(diǎn)編碼TRE際 2shRNA的DNA插入部位功 lfl.11..1.‘一么L.吵‘’”“‘’;。，ll.川:.ll’l\，了、·I一l、f一l一BI卜pGC:i一場/My獷o/GFP65491一p…圖1一1重組質(zhì)粒pTREM一 2shRNA結(jié)構(gòu)示意圖注:圖中為pGCsi質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖，全長6549bP，編碼shRNA的DNA使用u6啟動子進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，GFP為編碼綠色熒光蛋白的基因，AmPicillin、Hygromycin分別為氮節(jié)青盡案杭性、潮霉素抗性基因。 2pGCsi質(zhì)粒B別rnHI和 Hind111雙酶切結(jié)果(圖l一2)圖1一2質(zhì)粒雙酶切后l%瓊脂糖凝膠電泳圖注:pGCsi質(zhì)粒酶切前后比較左:線性化Pocsi質(zhì)粒(用 BamHI+Hind111雙酶切)，右:pGCsi質(zhì)粒

山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文3重組質(zhì)粒的PCR鑒定結(jié)果(圖1一3)將轉(zhuǎn)化菌液進(jìn)行PCR后電泳，對重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定篩選。結(jié)果顯示其中有三個(gè)質(zhì)粒為陽性重組質(zhì)粒，它們與未插入干擾片段的空載體相比目的片斷長達(dá)約65bP左右，與插入目的基因的片段長度相吻合，結(jié)果符合設(shè)計(jì)要求。圖1一3重組質(zhì)粒PCR電泳圖注:從左至右依次為oLZ000惻 ALadderMarker:200obp，l000bp，750bp，s00bp

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]RNA干擾作用（RNAi）研究進(jìn)展[J]. 陳忠斌,于樂成,王升啟.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2002(05)



本文編號：3127595