本文關鍵詞：神經(jīng)生長因子對哮喘小鼠肺組織γ-氨基丁酸A受體表達及氣道黏液分泌的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景及目的 支氣管哮喘是由多種細胞、細胞組分和神經(jīng)遞質(zhì)參與的氣道慢性的炎癥性疾病。近些年來,哮喘的發(fā)病率呈逐年上升趨勢,對哮喘防治的研究一直是各國醫(yī)學工作者探討的熱點。目前,許多研究都表明免疫機制占有重要作用,近年來,神經(jīng)源性因素在哮喘發(fā)病機制中的重要作用也日益受到重視。神經(jīng)生長因子(nerve growth factor, NGF)是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族的成員之一,是最早被發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)營養(yǎng)因子,NGF能夠調(diào)節(jié)細胞生長,是種多功能的因子,除了對神經(jīng)系統(tǒng)的作用以外,還參與了復雜的免疫-神經(jīng)相互作用,是免疫可塑性和神經(jīng)可塑性的雙重的調(diào)節(jié)因子。研究表明,NGF參與了多種疾病的發(fā)生,如潰瘍性結(jié)腸炎、類風濕性關節(jié)炎、慢性神經(jīng)炎、過敏性鼻炎、支氣管哮喘等,提示NGF在哮喘發(fā)生發(fā)展中具有重要的意義,但其具體作用的機制則需進一步研究。 GABA是成年哺乳動物大腦中的主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)。最近研究發(fā)現(xiàn),γ-氨基丁酸(y-aminobutyric acid, GABA)合成酶(GAD)和A型GABA受體(GABAAR)在人類和鼠肺的氣道上皮細胞表達,GABAAR由5個亞基所構(gòu)成,門控氯離子通道是由其的中心部位所形成,在GABAAR復合物的組裝和功能中α亞單位對起著主要作用。氣道黏液高分泌是哮喘特征之一,主要是由氣道杯狀細胞表達的黏蛋白上調(diào)的結(jié)果。MUC5AC是氣道主要的黏蛋白,它的表達受氣道上皮細胞的GABAAR的調(diào)控。 本實驗中,我們建立小鼠模型,研究探討NGF在氣道黏液分泌中的作用,研究哮喘小鼠哮喘模型的肺組織中的GABAARα、MUC5AC的表達水平及在NGF抗體干預后的改變,了解NGF、GABAARα、MUC5AC之間的關系。本研究旨在進一步探討NGF在哮喘氣道黏液分泌中的具體作用及機制,并為哮喘的早期干預治療提供理論依據(jù)。材料方法 6周齡清潔級雌性BALB/C小鼠30只,被隨機分為3組：對照組、哮喘組和NGF阻斷組,每組10只。實驗的第1天、第8天,哮喘組小鼠腹腔注射(OVA)/Al(OH)3(?)[含Al(OH)3100mg和OVA1mg)1mL的混合液進行致敏,第15天起,每天以2%OVA超聲霧化30分鐘激發(fā),連續(xù)進行7天。對照組的致敏和激發(fā)都使用生理鹽水來代替。NGF阻斷組哮喘模型的建立同哮喘組,但是在每次OVA超聲霧化前的3h,先通過鼻滴抗小鼠β-NGF抗體50μl(稀釋度1：50)。末次激發(fā)后24h后,腹腔注射用10%的水合氯醛(20mg/kg)來麻醉小鼠,暴露胸腔,在左主支氣管處將左肺結(jié)扎,后氣管插管,生理鹽水來灌洗小鼠的右肺,取肺泡灌洗液(BALF),離心后細胞沉渣用于細胞計數(shù)。取留左肺,其上葉使用4%的多聚甲醛用來固定,然后常規(guī)用石蠟包埋,切片備用,迅速將左肺下葉放入液氮中速凍,后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱備用。肺組織的切片進行HE染色來觀察氣道病理改變；免疫組化法檢測肺組織中MUC5AC、GABAARa蛋白的表達水平,逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應法(RT-PCR)檢測肺組織中MUC5AC、GABAARamRNA的表達水平；用SPSS18.0進行統(tǒng)計分析實驗數(shù)據(jù)。 結(jié)果 1一般癥狀：哮喘組小鼠在激發(fā)過程中出現(xiàn)安靜少動,弓背直立,打噴嚏,點頭樣喘息,大小便失禁等哮喘急性發(fā)作表現(xiàn)：NGF阻斷組與哮喘組相比,上述癥狀較稍輕；對照組無明顯的喘息癥狀。 2BALF細胞總數(shù)和分類數(shù)：哮喘組小鼠的BALF中細胞總數(shù)和嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、淋巴細胞的比率均比對照組顯著增多(P均0.05),NGF阻斷組的細胞總數(shù)和嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、淋巴細胞的比率均比哮喘組降低(P均0.05)。 3肺組織病理觀察：哮喘組小鼠支氣管上皮細胞脫落,管壁、血管壁周圍有炎性細胞浸潤,肺泡間隔變寬,肺泡腔內(nèi)有炎性滲出物；NGF阻斷組上述病變均較哮喘組減輕；對照組小鼠氣道上皮細胞完整,血管及氣管周圍沒有炎癥細胞浸潤。 4肺組織中GABAARα、MUC5AC蛋白的表達情況：哮喘組小鼠的肺組織中GABAARα、MUC5AC蛋白表達量均較對照組高(P均0.05),NGF阻斷組較哮喘組降低,但仍高于對照組(P均0.05)。 5肺組織中GABAARαmRNA、MUC5ACmRNA的表達情況：RT-RCR結(jié)果顯示,哮喘組小鼠的肺組織GABAARαmRNA、MUC5ACmRNA表達量均較對照組高(P均0.05),NGF阻斷組較哮喘組降低,但仍高于對照組(P均0.05)。 結(jié)論 1小鼠急性哮喘模型肺組織中GABAARα、MUC5AC表達量增加,提示GABAARα可能和哮喘發(fā)病時黏液過度分泌密切相關。 2阻斷NGF能降低哮喘小鼠肺組織中GABAARα、MUC5AC表達,提示阻斷NGF可減輕氣道黏液過度分泌,并可能通過下調(diào)GABAARα的表達參與調(diào)節(jié)氣道的黏液分泌。
【關鍵詞】：哮喘 小鼠 神經(jīng)生長因子 γ-氨基丁酸受體ARα MUC5AC
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 引言12-15
• 材料與方法15-24
• 結(jié)果24-28
• 討論28-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-41
• 附圖41-43
• 綜述43-59
• 神經(jīng)生長因子與支氣管哮喘43-54
• 參考文獻54-59
• 個人簡歷及在學期間發(fā)表的學術論文59-60
• 致謝60

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：神經(jīng)生長因子對哮喘小鼠肺組織γ-氨基丁酸A受體表達及氣道黏液分泌的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：310139