發(fā)布時間：2021-03-26 02:53

　　目的本課題旨在通過博來霉素誘導(dǎo)大鼠發(fā)生肺纖維化,探究自噬活性對肺纖維化的影響及其可能機(jī)制,為進(jìn)一步闡明肺纖維化發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法將12只Wistar雄性大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法平均分為對照組（A組）和實(shí)驗(yàn)組（B組）,每組各6只。每次將3只大鼠放入霧化裝置內(nèi),霧化15分鐘,根據(jù)體重?fù)Q算霧化體積3-4ml,每天霧化一次,持續(xù)霧化3天,實(shí)驗(yàn)組霧化吸入濃度為1mg/ml博來霉素（每次劑量5mg/kg）,對照組霧化吸入等量生理鹽水。霧化給藥后第25天進(jìn)行葡萄糖耐量測定;第28天收集大鼠血清、支氣管肺泡灌洗液和肺組織標(biāo)本。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清胰島素含量和支氣肺泡灌洗液AMPK含量;蘇木精-伊紅染色（HE）觀察肺組織病理改變;Masson染色法觀察肺組織膠原纖維生成;蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測肺纖維化相關(guān)指標(biāo)?-平滑肌肌動蛋白（?-SMA）、自噬相關(guān)標(biāo)志物p62、LC3Ⅱ/Ⅰ和信號通路相關(guān)蛋白及其調(diào)控蛋白p-Akt、mTOR、p-mTOR、PTEN和OTUD3的相對表達(dá)量。結(jié)果（1）實(shí)驗(yàn)組和對照組大鼠體重均呈持續(xù)增長趨勢,各時間點(diǎn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>... 

【文章來源】：福建中醫(yī)藥大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

自噬參與肺纖維化的機(jī)制設(shè)想圖

（4）室溫下血液自然凝固15-20分鐘后，于4℃，3000rmp條件下離心20分鐘，收集上清液分裝于不同EP管中，并做好標(biāo)記，保存于-20℃冰箱中。圖1-2 大鼠腹主動脈采血2.3.3 大鼠支氣管肺泡灌洗液制備：（1）用剪刀沿大鼠胸骨正中線剪開胸腹腔皮膚至頸部，逐層分離皮下組織。（2）首先將膈肌剪開，見肺臟組織塌陷后，直剪以劍突下方為起點(diǎn)，避開胸壁內(nèi)血管后沿胸骨中線向上剪開胸腔，充分暴露氣管、心肺及縱膈組織。（3）首先使用2.5毫升注射器抽取1.5毫升4℃生理鹽水并注滿采血針橡膠管，放置一旁。分離氣管表面薄層組織，使用縫合線結(jié)扎右主支氣管，在氣管中段氣管環(huán)處作一橫行切口，將采血針插入氣管內(nèi)，使用縫合線兩頭固定采血針。（4）注射器緩慢將生理鹽水注入氣管內(nèi)，見左肺稍微膨脹后立即回抽生理鹽水，重復(fù)操作10次

性福爾馬林中固定，用于石蠟包埋切片，其余肺葉先放入液氮罐速凍30分鐘，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱冷凍保存。圖1-4 大鼠肺組織2.4 石蠟包埋和切片（1）將上述大鼠肺組織放置于預(yù)先配備好的 10%福爾馬林溶液中固定 2 小時后，轉(zhuǎn)移至 4℃冰箱過夜，再放置于 70%乙醇溶液中。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]博來霉素不同給藥方式致大鼠肺纖維化模型探討[J]. 王鶴,張廣平,侯紅平,高云航,高雙榮,馬夢,張海靜,張鐘秀,陳騰飛,蘇萍,宋玲,楊依霏,李江,葉祖光.  中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2019(11)
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