STAT4和STAT6是Th0向Th1或Th2分化過程中的兩個關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,他們分別誘導(dǎo)Th1和Th2類細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄。CBP是核內(nèi)一種重要的協(xié)同激活分子,轉(zhuǎn)錄因子需通過競爭與CBP結(jié)合而啟動基因轉(zhuǎn)錄。有研究顯示,CBP在STAT4和STAT6介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄過程中均起非常重要的作用,STAT4和STAT6可能就是通過競爭性結(jié)合CBP上有限的位點而影響靶基因轉(zhuǎn)錄。本試驗擬分別構(gòu)建STAT4,STAT6真核表達(dá)質(zhì)粒（CBP表達(dá)質(zhì)粒由倫敦大學(xué)阮雄中教授友情饋贈）,通過分別超表達(dá)STAT4或STAT6,研究二者竟?fàn)幮耘cCBP結(jié)合從而影響Th1/Th2平衡的機(jī)制。目的:分別構(gòu)建STAT4,STAT6重組真核表達(dá)質(zhì)粒,與CBP表達(dá)質(zhì)粒一起按不同比例共轉(zhuǎn)染入COS7細(xì)胞,并分別檢測游離STAT4或STAT6的量。方法:采用RT-PCR方法從小鼠脾臟組織中擴(kuò)增STAT4/STAT6基因全長cDNA,T/A克隆到pMD19-T載體中,雙酶切后亞克隆入pIRES2-EGFP載體,構(gòu)建pIRES2-EGFP-STAT4/STAT6質(zhì)粒,經(jīng)限制性內(nèi)切酶鑒定并測序后,與pcDNA3- CBP共轉(zhuǎn)染入COS7細(xì)胞,2... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠總RNAFig.2-1TotalRNAofmouse

圖 2-1 小鼠總 RNAFig.2-1 Total RNA of mouseM：NDA Marker DL 2000 ，1：Total RNTAT4 目的基因 STAT4 cDNA，將擴(kuò)增產(chǎn)物于 1%瓊脂00bp 稍上方出現(xiàn)清晰、明亮、均一的 2-2，2-3）

2-4 STAT4 Inner PCR 純化產(chǎn)物Fig.2-4 Purified STAT4 Inner PCR produc DNA Marker，1：Purified STAT4 Inmple 質(zhì)粒為模板擴(kuò)增 STAT4 片后，采用 PCR 方法從重組 pM止密碼、XhoⅠ/KpnⅠ酶切位在紫外觀測儀中在 2027bp~247bp，長度與預(yù)計值相符（圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]過氧亞硝基陰離子對氣道上皮細(xì)胞的損傷作用[J]. 朱鐵年,趙瑞景,凌亦凌,谷振勇,周君琳.  中國病理生理雜志. 2001(06)



本文編號：3069922